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Tinción negativa de exosomas purificados: un procedimiento para visualizar la morfología de los exosomas mediante microscopía electrónica de transmisión

30 de abril de 2023

En este artículo

Resumen

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Fuente: Jung, M. K. et al. Preparación de muestras e imágenes de exosomas mediante microscopía electrónica de transmisión. J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe un procedimiento para la tinción negativa de exosomas purificados. Los exosomas teñidos negativamente se obtienen mediante microscopía electrónica de transmisión. Esta técnica ayuda a visualizar la morfología de los exosomas.

Protocolo

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1. Tinción negativa

  1. Descargue incandescente las rejillas EM de cobre de malla 200 recubiertas con película de formvar / carbono delgadas durante 1 minuto mediante un descargador de incandescente.
  2. Fije los exosomas purificados con 1 mL de paraformaldehído (PFA) al 2% durante 5 min.
    NOTA: Los vapores de paraformaldehído son tóxicos. Todo el trabajo debe realizarse en una campana extractora ventilada.
  3. Cargue 5-7 μL de solución de suspensión de exosomas en la rejilla e incube durante 1 min. Si la concentración de exosoma es demasiado alta, diluya la concentración a la mitad o a un quinto.
  4. Teñir inmediatamente con las ~20 gotas de solución filtrada de acetato de uranilo (UA) al 1% en la superficie de la rejilla EM con una jeringa.
  5. Retire el exceso de solución de UA en la rejilla contactando el borde de la rejilla con papel de filtro.
  6. Enjuague rápidamente la rejilla con una gota de agua. Este paso eliminará el exceso de solución para manchar.
  7. Coloque la rejilla sobre la mesa sosteniéndola con pinzas y cubra la rejilla parcialmente con un plato de cultivo para que se seque durante 10 minutos a temperatura ambiente.
  8. Almacene la cuadrícula en una caja de cuadrícula EM para su observación futura por un TEM a 80 kV.

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Divulgaciones

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No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Acetato de uraniloems22400Producto químico peligroso
Microscopía electrónica de transmisiónJEOLJEM2200FS
Descargador de incandescenciaJEOLJFC1100E
ParaformaldehidoemsAño 19210
Formvar recubierto de carbono Cobre
Rejilla (malla 200)		emsFCF200-CU
Formvar Nickel recubierto de carbono
Rejilla (malla 200)		emsFCF200-NI

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Etiquetas

Purificaci n de exosomastinci n con acetato de uranilofijaci n con paraformaldeh dopreparaci n de rejillas de EMtratamiento de descarga luminiscenteadsorci n de exosomassecado de rejillas

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