Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Gastrectomía vertical en manga y procedimientos simulados
- El día de la cirugía, pesa los ratones para obtener una medición de peso de referencia.
- Equipe el quirófano con un sistema de anestesia, un baño de agua caliente y una almohadilla térmica. Ajuste el baño de agua a 37 °C y utilícelo para calentar una solución salina al 0,9% para el riego. Limpie el campo quirúrgico con etanol al 70% y utilice una técnica estéril para abrir el paquete y las herramientas quirúrgicas esterilizadas en autoclave.
nota: La almohadilla térmica se utiliza para mantener al animal caliente durante la cirugía y la recuperación de la anestesia.
- Utilizando una cámara de inducción, anestesiar al ratón con isoflurano al 5% y un caudal deO2 de 1 L/min. Confirme que el ratón está en el plano adecuado de anestesia realizando un pinzamiento del dedo del pie. Mantener el ratón con isoflurano al 1-3% y un caudal deO2 de 0,6 L/min una vez que se haya alcanzado un plano de anestesia consistente.
- Una vez que el ratón esté anestesiado, colóquele un ungüento ocular (consulte la Tabla de materiales) en sus ojos para mantenerlos húmedos durante la cirugía. En este momento, administrar también un analgésico, como meloxicam (2 mg/kg por vía subcutánea). Corta el cabello desde el ombligo hasta la axila, sujetando la piel suavemente para proporcionar tensión.
- Como la piel del ratón es fina y delicada, tenga cuidado de no causar lesiones cutáneas al cortarle el pelo. Limpiar la piel con povidona yodada y alcohol.
- Póngase guantes estériles y prepare el campo quirúrgico estéril y los instrumentos. Realice el resto del procedimiento utilizando una técnica estéril. Prepare el campo quirúrgico estéril colocando paños quirúrgicos estériles a ambos lados del ratón. Usa papel de aluminio esterilizado en autoclave para crear un paño quirúrgico para el ratón.
- Corta un pequeño agujero en el papel de aluminio para permitir el acceso al abdomen del ratón.
- Haga una incisión en la piel desde la mitad del abdomen (ombligo) hasta el nivel del cartílago xifoides con una tijera de iris. Identifique la línea alba y use unas tijeras de iris para cortar la pared del cuerpo a lo largo de la línea alba. Use CTA para elevar suavemente el estómago fuera del abdomen y luego diseccione sin rodeos el epiplón mayor de la curvatura mayor del estómago.
- Ligar la arteria gástrica corta que discurre entre el fondo del estómago y el bazo mediante la colocación de dos ligaduras mediante sutura absorbible de monofilamento 7-0. Use tijeras de resorte para cortar entre las dos ligaduras. Una vez seccionada la arteria, se exterioriza completamente el estómago de la cavidad abdominal. Coloque una gasa debajo del estómago y humedézcala con solución salina para mantener el tejido húmedo.
- Para el procedimiento VSG, ligar las ramas prominentes de la arteria y la vena gástrica con una sutura absorbible de monofilamento 7-0 con una aguja cónica usando 3 tiros para cada nudo. Coloque las ligaduras justo debajo (es decir, hacia la curvatura menor del estómago) de la línea de transección prevista
nota: La línea prevista de transección comienza a ~2 mm por encima (es decir, hacia la mayor curvatura del estómago) de la muesca cardíaca del estómago y al menos 2 mm por debajo del margo pilcatus y se extiende hasta el extremo proximal del lóbulo derecho del páncreas. Por lo general, hay 4 vasos por pared gástrica que deben ligarse; Sin embargo, esto puede variar entre ratones.
- Para evitar el derrame del contenido gástrico durante la gastrectomía, coloque una línea continua simple de sutura que pase a través de ambas paredes gástricas justo debajo de la línea de transección prevista utilizando una sutura absorbible de monofilamento 6-0 con una aguja cónica. Comienza la línea de sutura a la derecha del esófago y por debajo del margo pilcatus y termina justo por encima del páncreas.
- Coloque hemostáticos de punta delgada por encima de la línea de sutura y use tijeras de resorte para cortar entre la línea de sutura y los hemostáticos. Extraer el tejido gástrico seccionado del campo quirúrgico estéril. Use CTA para limpiar la sangre y la digestión del estómago.
- Refuerce la aposición de las paredes gástricas mediante una sutura absorbible monofilamento 6-0 con una aguja cónica utilizando un patrón discontinuo simple
nota: Se recomienda un patrón de sutura discontinuo simple, ya que proporciona un cierre más seguro que el patrón de sutura continua simple.
- Enjuague el remanente gástrico con solución salina durante todo el procedimiento para mantener el tejido húmedo y limpio. Utilice una aguja de sonda nasogástrica de 20 G conectada a una jeringa de 20 ml para realizar el lavado gástrico con solución salina. Use este tamaño para asegurarse de que se proporcione la presión adecuada sin correr el riesgo de dañar el tejido gástrico por una presión excesiva o daño accidental al tejido gástrico por el uso de una aguja puntiaguda regular.
- Use un mínimo de 20 nudos para cerrar el estómago de forma segura; preste atención al cierre a lo largo del lado esofágico, ya que este lado es más difícil de acceder y, por lo tanto, suele ser un sitio de dehiscencia.
- Asegúrese de que no haya fugas presionando suavemente el estómago con CTA. Si se identifican fugas, coloque nudos discontinuos simples adicionales en las áreas de fuga y luego vuelva a realizar la prueba de fugas. Prueba de fugas hasta que no se detecte ninguna fuga.
- Realice un lavado final completo del estómago con al menos 60 ml de solución salina para asegurarse de que no hayan quedado partículas infecciosas.
- Vuelva a colocar el estómago en la cavidad abdominal debajo del hígado usando una CTA. Coloque CTA a lo largo de la cara dorsal de la cavidad abdominal para absorber todo el exceso de líquido. Con una aguja roma de 18 G, inyecte la solución de Ringer lactato (LRS) con o sin antibióticos (0,5 mL LRS +/- 20 mg/kg de enrofloxacina) directamente en la cavidad abdominal, justo antes del cierre><.
nota: Esto reemplaza la pérdida de líquido experimentada durante la cirugía y proporciona un método para la aplicación directa de antibióticos en el sitio quirúrgico para ayudar con la recuperación.
- Cierre la capa muscular abdominal con una sutura absorbible de monofilamento 6-0 con una aguja cónica en un patrón discontinuo simple. A continuación, cierre la capa de la piel con una sutura absorbible de monofilamento 6-0 en un patrón continuo sencillo.
- Coloque adhesivo tisular sobre la piel y doble la piel sobre la línea de sutura para enterrar la sutura y que el ratón no pueda interrumpir el cierre de la herida después de la operación.
- Apague el isoflurano y deje que el mouse se recupere en la almohadilla térmica durante 10-15 minutos antes de devolverlo a su jaula de origen. No deje al animal desatendido hasta que haya recuperado la conciencia y sea capaz de moverse.
- Mantenga a los animales alojados individualmente hasta que se recuperen por completo de la cirugía.
nota: Si se van a obtener mediciones precisas de la ingesta de alimentos a lo largo del estudio, los ratones deben seguir alojados individualmente durante todo el estudio. Existe el riesgo de obstrucción por cuerpos extraños al comer ropa de cama de jaulas caseras. Los animales deben ser alojados en jaulas libres de ropa de cama, excepto por el material de anidación para proporcionar enriquecimiento (ver Tabla de Materiales).
