Extracción del músculo esquelético de las extremidades posteriores: un procedimiento para extirpar los músculos esqueléticos de las extremidades posteriores a partir de un modelo murino

Resumen

Fuente: Bonetto, A. et al. El ratón portador de tumores de carcinoma de colon-26 como modelo para el estudio de la caquexia por cáncer. J. Vis. Exp. (2016)

En este video, describimos el procedimiento para extirpar los músculos esqueléticos de las extremidades posteriores a partir de un modelo de ratón. Los músculos extirpados se pueden almacenar a temperaturas más bajas hasta un análisis posterior.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Escisión de tejidos y órganos

NOTA: Para el uso de tejidos en ensayos bioquímicos o de biología molecular, planee pesar cada órgano y tejido y colocar un fragmento inmediatamente en criotubos premarcados. Congele rápidamente en nitrógeno líquido y almacene a -80 °C.

1. Para evitar la contaminación de las muestras de tejido con piel, rocíe etanol al 70% en todo el cuerpo.
2. Coloque el ratón en una cama de disección en posición supina y extienda una extremidad verticalmente sujetando el pie a una pinza de bureta elevada.
3. Agarre la piel de la extremidad inferior con pinzas Dumont y use las tijeras finas curvas para quitar suavemente la piel y la fascia, exponiendo los vientres musculares subyacentes de la extremidad inferior.
4. Identificar el músculo gastrocnemio en la extremidad inferior posterior por su origen en los cóndilos lateral y medial en el fémur posterior y su inserción en el calcáneo a través del tendón calcáneo.
   1. Proceda a cortar el tendón gastrocnemio calcáneo. Agarre el extremo distal del gastrocnemio con pinzas de Dumont y tire del vientre muscular hacia su origen. Con unas tijeras, corte el músculo en el origen lo más cerca posible del fémur. Coloca el músculo en un plato. Péselo inmediatamente y congélelo en un tubo en nitrógeno líquido.
      nota: Asegúrese de no extirpar el músculo sóleo junto con el gastrocnemio. Si eso ocurre, retire con cuidado el sóleo tirando suavemente de él con las pinzas.
5. Se procede a la identificación y extirpación del músculo tibial anterior desde su origen en la superficie anterolateral de la tibia y su inserción en el cuneiforme medial a través de su tendón distal.
   1. Para tener apalancamiento, sostenga el pie agarrando los dedos con el dedo índice y el pulgar. Inserte la punta de las pinzas de Dumont inmediatamente debajo del tendón distal superficial del tibial y mueva las pinzas de tal manera que el lado romo se pueda usar para separar el vientre del músculo tibial del tejido conectivo subyacente.
   2. Corta el tendón distal con las tijeras curvas finas y luego corta el músculo en el origen lo más cerca posible de la tibia.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Ratones CD2F1	Harlan	60
Aparatos de anestesia	EZ-Anesthesia	EZ-7000
oct	Tejido-Tek	4583
Criostato	Leica	CM1850
Discos de corcho	Ciencias de la Microscopía Electrónica	63305
Microtainer	Bd	365873
Portaobjetos de vidrio Superfrost plus	VWR	48311-703
Estreptomicina-Penicilina	Cellgro	30-002-CI