Aislamiento de criptas intestinales: un método para aislar criptas enteras del intestino delgado de un modelo murino

Resumen

Fuente: Schewe, M. et al. El ensayo de reconstitución de organoides (ORA) para el análisis funcional de células madre intestinales y de nicho. J. Vis. Exp. (2017)

En este video, demostramos una técnica para aislar criptas enteras del intestino delgado de un ratón. Las criptas enteras aisladas se pueden utilizar para propagar organoides 3D de larga vida y que se renuevan automáticamente in vitro.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Preparación de instrumentos, medios de cultivo y platos

1. Esteriliza en autoclave un juego de tijeras intestinales, tijeras normales y pinzas en un recipiente estéril.
2. Coloque un plato de 96 pocillos (fondo plano) en una incubadora a 37 °C.
3. Prepare 10 mL de medio de cultivo completo con los reactivos enumerados en la Tabla de Materiales.
4. Incubar el medio completo a 37 °C en un baño de agua.<....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
DMEM/F-12 avanzado	Thermo Fisher Scientific	12634-010
Penicilina/Estreptomicina	Thermo Fisher Scientific	15140122	Concentración final: 1%
Glutamax	Thermo Fisher Scientific	35050061	Concentración final: 10 mM
Hepes	Thermo Fisher Scientific	15630080	Concentración final: 10 mM
FEAG murino recombinante	Thermo Fisher Scientific	PMG8041	Concentración final: 50 ng/ml
Noggin murino recombinante	Peprotech	250-38	Concentración final: 100 ng/ml
Y27632	sigma	Y0503	Concentración final: 10 μM
Jagged-1	Anaspec Bio	AS-61298	Concentración final: 1 μM
R-espondina murina recombinante	Sistemas de investigación y desarrollo	3474-RS-050	Concentración final: 1 mg/ml
B6.129P2-LGR5TM1(cre/ERT2)Cle/J	Laboratorios Jackson	8875
Tubos de baja unión	Eppendorf	Z666548-250EA