Inoculación intramucosa de células cancerosas en un modelo murino: un procedimiento para establecer un modelo ortotópico de cáncer de cabeza y cuello en ratones

Resumen

Fuente: Oweida, A. J. et al. Inoculación intramucosa de células de carcinoma de células escamosas en ratones para la evaluación del perfil inmunitario tumoral y la respuesta al tratamiento. J. Vis. Exp. (2019)

En este video, desarrollamos un modelo murino de cáncer ortotópico de cabeza y cuello mediante la inoculación intramucosa de la línea celular de carcinoma de células escamosas. El ratón portador de tumores mostraría semejanza con los síntomas clínicamente relevantes de la enfermedad humana y, por lo tanto, se puede utilizar para estudiar la progresión del cáncer y descubrir nuevas estrategias terapéuticas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Inyección de células en ratones

1. Prepare una mezcla 1:1 de células:matriz de membrana basal (50 μL cada una).
2. Agregue primero las celdas; luego, pipetee gradualmente la matriz de la membrana basal. Evite introducir burbujas de aire. Asegúrese de que la mezcla se prepare inmediatamente antes de la inyección en el animal. La adición de células a la matriz de la membrana basal durante un período prolongado de tiempo puede dar lugar a que las células se asienten en la mezcla de la matriz, lo que dificulta la agitación vigorosa de la mezcla. Esto causará una variabilidad considerable en el tamaño del tumor entre ratones.
3. Mezclar suavemente. Asegúrese de que todos los pasos relacionados con la matriz se realicen en hielo. La matriz de la membrana basal se polimerizará a temperatura ambiente.
4. Prepare las jeringas para la inoculación.
5. Cargue jeringas de insulina de 0,5 ml (23 g) con 100 μl de la solución de matriz de célula/membrana basal.
6. Mantenga las jeringas en hielo para evitar la polimerización de la matriz de la membrana basal.
7. Anestesiar a los ratones colocándolos en una cámara con isoflurano y oxígeno (2,5%).
8. Asegúrese de que los ratones estén profundamente anestesiados antes de realizar la inyección (asegurándose de la falta de respuesta a un pellizco en el dedo del pie).
9. Inserte la aguja en la región bucal derecha o izquierda. Esto se realiza a través del espacio abierto disponible a ambos lados de la boca.
10. Asegúrese de que la lengua del ratón no esté en el camino.
    NOTA: Es fácil pinchar la lengua, lo que provocará tumores en la lengua. Mueva la lengua hacia el lado opuesto si es necesario.
11. Mantenga la jeringa paralela a la región bucal mientras esté dentro de la cavidad oral.
12. Cuando esté listo para inyectar, tire de la jeringa hacia atrás e inserte lentamente la jeringa en un ángulo de 10°.
13. Inyectar 100 μL de la suspensión de la matriz de la célula/membrana basal durante un período de 5 s.
14. Sostenga la jeringa en su lugar durante 5 segundos adicionales para asegurarse de que se inyecte todo el material.
    NOTA: Para el control de ratones no portadores de tumores, inyecte una mezcla de medios y matriz libres de suero (como se describió anteriormente) sin las células tumorales.
15. Retire la jeringa suavemente.
16. Continúe el procedimiento anterior con los ratones restantes.
17. Espere 1 semana hasta que los tumores comiencen a aparecer macroscópicamente (50-200^mm3 para las células B4B8 y LY2).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
HBSS	ThermoFisher Scientific	14175079	Sin calcio, sin magnesio, sin fenotipo rojo
Citómetro de masa Helois	Fluidigm	Na
Matriz de membrana Matrigel	Corning	CB-40234B