Pretratamiento tisular FFPE para ARN CISH: Un procedimiento para procesar secciones de tejido fijadas en formol e incluidas en parafina para la hibridación cromogénica in situ de ARN

Resumen

Fuente: Outh-Gauer, S. et al. Hibridación cromogénica in situ como herramienta para el diagnóstico del cáncer de cabeza y cuello relacionado con el VPH. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra los pasos involucrados en el pretratamiento de muestras de tejido FFPE para la hibridación cromogénica in situ de ARN. El proceso de pretratamiento ayuda a mantener la integridad de los ácidos nucleicos dentro de las células y la morfología general del tejido.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Preparación de los materiales

1. Preparación de 1x reactivo de recuperación de dianas
   1. En un vaso de precipitados grande, agregue 70 mL de reactivo de recuperación de objetivo 10x (consulte la Tabla de materiales) a 630 mL de agua destilada.
   2. Coloque el vaso de precipitados en una placa calefactora con un agitador ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Horno HybEZ (110v)	Diagnóstico Celular Avanzado Inc.	321710
Bastidor deslizante HybEZ	Diagnóstico Celular Avanzado Inc.	300104
Bolígrafo de barrera hidrofóbica ImmEdge	Diagnóstico Celular Avanzado Inc.	310018
RNAscope H202 y reactivo de proteasa más	Diagnóstico Celular Avanzado Inc.	322330	Peróxido de hidrógeno x2 y Proteasa Plus x 1
Reactivos de recuperación de dianas de RNAscope	Diagnóstico Celular Avanzado Inc.	322000