Cosecha de membrana corioalantoidea de pollo: un método para aislar la membrana corioalantoidea portadora de injerto tumoral del huevo de gallina

Resumen

Fuente: Schmidt, L. B. et al. El modelo in vivo de membrana corioalantoica de pollito para evaluar la invasión perineural en el cáncer de cabeza y cuello. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra el aislamiento de la membrana corioalantoidea portadora de tumores del embrión de pollo. El CAM cosechado se puede utilizar para otras aplicaciones posteriores.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Cosechando la CAM

1. Prepare placas de 6 pocillos con 4% de PFA (paraformaldehído) pH 7.0; un pocillo por huevo, 2 mL por pocillo.
2. Lleva los huevos a una mesa de laboratorio. Usando una aguja conectada a una jeringa para perforar el apósito de película, deje caer alrededor de 300 μL de PFA sobre el CAM para endurecer ligeramente el CAM, facilitando así el proceso de recolección. Repita esto para todos los huevos.
3. Con una tijera, retire la mitad superior de la cáscara del huevo (donde se encuentra la ventana de operación) con el CAM adherido a ella (Figura 1I). Reduzca el tamaño de esta mitad a aproximadamente 3 cm de diámetro. Sujete el CAM con pinzas finas y sepárelo de la cáscara del huevo mientras lo coloca en PFA.

Resultados

Figura 1: Injerto de DRG, células y recolección de CAM: En el día 8: A. La CAM se observa fácilmente después de la eliminación de la membrana de cera de parafina. B-C. Con pinzas finas, se coloca DRG en el CAM. D. El huevo se cubre con un apósito de película y se coloca en la incubadora; Las flechas señalan las aberturas que están cubiertas. En el...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
PFA (solución de paraformaldehído)	Sigma-Aldrich	# P6148-1KG	Diluir en agua para hacer una solución de PFA al 4%
Tijera quirúrgica fina, recta y afilada	Herramientas de Bellas Ciencias, (FST)	#14060-09	Se utiliza para recolectar el tejido CAM el día 17
Huevos fecundados de Lohmann White Leghorn			Óvulos fertilizados en los primeros días de fertilización, preferiblemente en el primer día después de la fertilización. Los huevos utilizados en este protocolo provienen de la granja avícola de la Universidad Estatal de Michigan
Pinzas Graefe extrafinas, rectas	Herramientas de Bellas Ciencias, (FST)	# 11150-10	Se utiliza para injertar DRG en el CAM el día 8 y para recolectar tejido CAM el día 17