Inoculación ortotópica de células de cáncer de tiroides en tiroides murina: un procedimiento para establecer un modelo de ratón de cáncer de tiroides ortotópico

Resumen

Fuente: Julia Ramírez-Moya, et al. Inhibición in vivo de microARN para disminuir el crecimiento tumoral en ratones. J. Vis. Exp. (2019)

Este video describe el procedimiento para la inoculación ortotópica de células de cáncer de tiroides en la glándula tiroides de modelos de ratón, que luego pueden servir como una valiosa plataforma para evaluar la carcinogénesis y descubrir posibles estrategias de tratamiento.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Inoculación ortotópica tiroidea de células

1. Preparación de células
   1. Diseñar una línea celular de cáncer de tiroides humano Cal62 para sobreexpresar una construcción transgénica que expresa constitutivamente GFP y luciferasa. Seleccionar las células transgénicas por resistencia a los antibióticos o clasificando las células GFP positivas con citometría de flujo.
   2. Cultive estas células en DMEM suplementado con antibióticos (penicilina y estreptomicina) y 10% de FBS a 37 °C y 5% de CO₂.
   3. Suspender 1 x 10⁵ celdas en 5 μL de PBS.
2. Inoculación celular en la glándula tiroides de ratones
   1. Inyecte 100 μL de analgésico (buprenorfina) y 100 μL de antibiótico (cefalosporina) por vía subcutánea en ratones BALB/c nu/nu de 7 semanas de edad. Desinfecte el lugar de la inyección con alcohol.
   2. Inyecte 5 μL de la solución celular en la glándula tiroides de los ratones.
      1. Anestesiar al ratón con isoflurano al 3% mezclado con oxígeno y colocarlo bajo un microscopio estereoscópico en un gabinete de flujo estéril. Evaluar el nivel de anestesia mediante un reflejo pedal (pellizco firme del dedo del pie) y ajustar la administración de anestésico según corresponda para mantener el plano quirúrgico.
      2. Aplique ungüento oftálmico en ambos ojos para prevenir la desecación.
      3. Por cada ratón, desinfectar el cuello con yodopovidona y hacer una incisión de aproximadamente 2 cm en la piel con unas tijeras. Una vez abierto, exponer el cuello desplazando las glándulas salivales.
      4. Diseccionar los músculos de la correa con pinzas de disección y/o tijeras para exponer la tráquea y la glándula tiroides. Con una jeringa de 10 μL, inyecte 5 μL de la solución celular en el lóbulo tiroideo derecho, ubicado al lado del cartílago cricoides.
      5. Reposicione las glándulas salivales y suture la incisión con seda utilizando suturas trenzadas, recubiertas y no absorbibles.
      6. Agregue yodopovidona en el área de la herida y coloque al ratón sobre una manta térmica mientras se recupera de la anestesia.
   3. Al día siguiente de la cirugía, inyecte analgésico subcutáneo (buprenorfina) y agregue 3 mL de ibuprofeno líquido (40 mg/mL) en 250 mL de agua de bebida durante 1 semana.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Matriz de membrana basal: Matriz de membrana basal Matrigel de alta concentración	Corning	#354248
Reactivo de administración in vivo: Reactivo Invivofectamine 3.0	Termo Fisher	IVF3005
Software de imagen in vivo: Sistema de imagen IVIS-Lumina II	Ciencias de la vida de Caliper