Incrustación de esferoides 3D en gotas de gel de agarosa: una técnica para preservar los esferoides para el análisis posterior

En este artículo

Resumen

Fuente: Rolver, M. G. et al. Evaluación de la viabilidad y muerte celular en cultivos esferoidles 3D de células cancerosas. J. Vis. Exp. (2019)

Este video describe la técnica para incrustar esferoides 3D en gotas de gel de agarosa para su conservación. Los esferoides 3D integrados se pueden utilizar posteriormente para el análisis posterior.

Protocolo

1. Incrustación de esferoides 3D

Prepare el gel de agarosa en el que se incrustan los esferoides (solo es necesario la primera vez que realiza el protocolo)
1. Mezclar 1 g de bacto-agar en 50 mL de ddH₂O.
2. Calentar lentamente en el horno microondas hasta que el bacto-agar se haya disuelto y se haya formado un gel homogéneo. No permita que el gel hierva.
3. Mantener el bacto-agar caliente en un baño de agua a 60 °C.
4. Mantener a 4 °C entre experimentos.
Incrustación de esferoides
1. El día 1, para cada afección, reúna un mínimo de 12 esferoides en un tubo de 1,5 ml.

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Resultados

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Figura 1: Fijación, inclusión y análisis inmunohistoquímico de esferoides. (A) Representación esquemática del protocolo de inclusión de esferoides. Los pasos individuales están marcados como (i-vii). (B) Imagen del esferoide MDA-MB-231 incrustado. Barra de escala: 50 μm. (C) Imagen representativa del esferoide MDA-MB-231 .......