Ensayo de metil tiazolil tetrazolio o MTT: ensayo colorimétrico para medir la resistencia a los medicamentos mediante la determinación de la actividad metabólica en las células cancerosas

Resumen

Fuente: Sciarrillo, R. et al. Uso de la secuenciación de ARN para detectar nuevas variantes de empalme relacionadas con la resistencia a los medicamentos en modelos de cáncer in vitro. J. Vis. Exp. (2016)

Este video describe el ensayo colorimétrico, ensayo de metil tiazol tetrazolio (MTT), para medir la citotoxicidad inducida por fármacos en células cancerosas y determinar su actividad metabólica. Este ensayo se basa en la conversión metabólica de las sales de tetrazolio en productos coloreados, que reflejan la actividad mitocondrial de las células.

Protocolo

1. Ensayo MTT para células leucémicas

1. Prepare con anticipación la solución de MTT: Disuelva 500 mg de formazano MTT en 10 mL de PBS y revuelva (protegido de la luz) con un agitador magnético durante aproximadamente 1 h. Esterilice la solución con un filtro de 0,22 μm.
   nota: La solución puede almacenarse en alícuotas de 10 mL a -20 °C. Proteger de la luz directa después de la descongelación.
2. Prepare con anticipación el isopropanol acidificado: Agregue 50 mL de HCl 2 M a 2,5 L de isopropanol.
   nota: Guarde la solución durante al menos un mes a temperatura ambiente antes de usarla. Si e....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
CCRF-CEM	ATCC, Manassas, VA, EE. UU.	ATCC CCL-119
RPMI-1640	Gibco, Carlsbad, CA, EE. UU.	11875093
Suero fetal bovino y ternero	Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemania	758093
sulfato de estreptomicina de penicilina G	Gibco, Carlsbad, CA, EE. UU.	15140122
Tris(hidroximetil)-aminometano	Sigma Aldrich	252859
Matraces de cultivo celular CELLSTAR, cuadrado de 25 centímetros	Greiner Bio-One, Frickenhausen, Alemania	82051-074
MTT formazan	Sigma Aldrich	M2003
Anthos-Elisa-reader 2001	Labtec, Heerhugowaard, Países Bajos		Espectrofotómetro de placa UV-Vis de 96 pocillos
Placas de pocillos Greiner CELLSTAR de 96	tes Greiner/Sigma	M0812-100EA
Solución salina tamponada con fosfato (NaCl 0,9%)	B.Braun Melsungen AG, Alemania	362 3140
Solución de tripsina/EDTA 100 ml	Lonza, Basilea, Suiza	CC-5012