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Cribado de muerte celular mediante tinción DAPI: un método para el cribado rápido de la muerte celular clonogénica inducida por IR en líneas celulares cancerosas

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Kobayashi, D. et al. Protocolo de un paso para la evaluación del modo de muerte celular clonogénica inducida por radiación mediante microscopía de fluorescencia. J. Vis. Exp. (2017)

Este video demuestra la metodología para detectar los principales perfiles de muerte celular en líneas celulares cancerosas inducidas por radiación ionizante (IR) utilizando el ensayo de tinción DAPI. Los núcleos teñidos con DAPI de las células diana que experimentan muerte celular exhiben morfologías distintas y pueden identificarse fácilmente mediante microscopía de fluorescencia.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Preparación de materiales

  1. cubreobjetos para autoclave
    1. Coloque los cubreobjetos en un vaso de precipitados.
    2. Cubra el vaso de precipitados con papel de aluminio.
    3. Autoclave a 121 °C a 15 psi durante 20 min.
    4. Secar a 50 °C. Conservar a temperatura ambiente en una campana de cultivo.
  2. Preparación de la solución de fijación: 3% de paraformaldehído + 2% de sacarosa en solución salina tamponada con fosfato (PBS)
    1. A un frasco de vidrio de 1.000 ml, agregue 700 ml de PBS y 30 g de paraformaldehído.
      cautela: El paraformaldehído es corrosivo, use ....

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Cubreobjetos MatsunamiC013001
Paraformaldehido Sigma-Aldrich P6148-1KG
sacarosa Sigma-Aldrich84097-250G
Solución salina tamponada con fosfato Cosmo Bio16232000
escalpelo Kai MédicoNo.20, 520-A
Placa de cultivo celular de 35 mm halcón353001
Microscopio de fase invertida ShimazuLlame al 114-909
Irradiador de rayos X Faxitron BiopticsFaxitron RX-650
Plato de cultivo cuadrado Corning431110
Vidrio deslizante MatsunamiPro-11
Reactivo de tinción DAPI Señalización celular 8961S
Microscopio de fluorescencia Nikon ECLIPSE Ni
microscopio de fluorescencia filtro DAPI NikonU-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
Lente de microscopio de fluorescencia (20×) NikonPlan Apo λ 20X/0.75
Lente de microscopio de fluorescencia (60×, aceite) NikonAceite Plan Apo λ 60X/1.40
aceite OlimpoN5218600
Cámara CCD NikonDS-QI2
Software de adquisición de imágenes digitales NikonDocumento NIS-Elements
Limpiador de lentes Olimpo OT0552
cloroformo Wako035-02616

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Cell Death ScreeningDAPI StainingIonizing RadiationClonogenic Cell DeathFluorescence MicroscopyApoptosis DetectionMitotic CatastropheSenescence AnalysisCancer Cell LinesFixation Protocol

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