Modelo de células madre de glioma marcadas con luciferasa: un método mediado por lentivirus para preparar células madre de glioma marcadas con luciferasa para estudios terapéuticos in vitro

>1. Preparación de GSCs marcadas con luciferasa

1. Comience con el cultivo de GSC y centrifuga a 70 x g durante 3 min a temperatura ambiente.
2. Retirar el sobrenadante y digerir las células con accutasa durante 4 min a 37 °C. Utilice una punta de 200 μL y pipetee repetidamente para disociar y volver a suspender el pellet celular.
3. Diluya las células a 2 x 10⁵ células por pocillo en una placa de cultivo de 12 pocillos y cultive las células durante la noche.
4. Añadir 30 μL de sobrenadante del virus luciferasa-EGFP (título >10⁸ TU /mL) en cada pocillo de la placa y luego centrifugar las células a 1.000 x g durante 2 h a 25 °C. Cultivar las células durante la noche.
5. Refresque el medio al día siguiente y cultive las células durante otras 48 h.
6. Observe las células bajo un microscopio fluorescente para confirmar la apariencia de las células GFP positivas.
7. Utilice un clasificador de celdas de flujo para clasificar y seleccionar las GSC con alta fluorescencia GFP para seguir cultivando las células.