Aislamiento de células mononucleares a partir de cerebro de ratón: una técnica de centrifugación de gradiente de densidad para aislar células mononucleares residentes en el cerebro

Abstract

Fuente: Ji, Z. et al. Análisis citométrico de flujo de la infiltración de linfocitos en el sistema nervioso central durante la encefalomielitis autoinmune experimental. J. Vis. Exp. (2020)

En este video, realizamos el aislamiento de células mononucleares del cerebro de un ratón utilizando centrifugación por gradiente de densidad. La suspensión de célula mononuclear aislada se puede utilizar para análisis posteriores posteriores.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de suspensión unicelular del cerebro

1. Divida el medio de gradiente de densidad en una proporción de 9:1 con PBS en un tubo cónico de 15 mL para producir una solución final al 100%.
2. Anestesiar ratones en el pico de EAE con una inyección intraperitoneal de pentobarbital sódico al 1% (50 mg/kg) y perfundir intracardíacamente con 20 mL de PBS estéril helado. Para lograrlo, inyecte PBS de manera lenta y constante en el ....

Results

Figura 1: Esquema de la configuración del gradiente de Percoll para el aislamiento de células mononucleares.

....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Homogeneizador de rebote	Wheaton	353107542
Percoll	Ge	17-0891-01