Cocultivo de células de glioblastoma en neuronas modeladas: una técnica para monitorear la migración de células de glioblastoma en neuronas de hipocampo de rata in vitro

Resumen

Fuente: Guyon, J. et al. Cocultivo de células madre de glioblastoma en neuronas modeladas para estudiar la migración y las interacciones celulares. J. Vis. Exp. (2021)

Este video describe un ensayo de cocultivo de células de glioblastoma en neuronas con micropatrones, que imitan la invasión de los tractos neuronales mielinizados por las células madre similares al glioblastoma a medida que migran sobre las neuronas en los espacios peritumorales. Este ensayo puede ayudar a analizar los efectos de los fármacos que inhiben la migración de las células de glioblastoma en las neuronas de un glioma.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparación de las diapositivas estampadas

1. Preparación del sustrato para el micropatrón
   1. Trate los cubreobjetos circulares de vidrio de 18 mm mediante activación por aire/plasma durante 5 min. Coloque los cubreobjetos en una cámara cerrada con 100 μL de (3-aminopropil) trietoxisilano en un desecador durante 1 h.
   2. Incubar con 100 mg/mL de valerato de poli (etilenglicol)-succinimidilo (peso molecular....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
(3-aminopropilo) trietoxisilano	sigma	440140-100ML	El grupo amino es útil para la bioconjugación de mPEG-SVA
Placa de fondo redondo de 96 pocillos	Sarstedt	2582624	Se utiliza para preparar esferoides
Accutase	Gibco	A11105-01	Almacenada a -20 °C (a largo plazo) o 4 °C (a corto plazo), enzima de disociación de esfera
B27	Gibco	Año 12587	Almacenado a -20 °C, descongelar antes de usar
Factor básico de crecimiento de fibroblastos	Peprotech	100-18B	Almacenado a -20 °C, descongelar antes de usar
Portaobjetos de la cámara de conteo de células Countess	Invitrogen	C10283	Acostumbrado al recuento de células
Cubreobjetos	Marienfeld	111580	Sustrato de cultivo celular
Cartuchos desecadores	sigma	Z363456-6EA	Se utiliza para reducir la humedad durante el tratamiento con trietoxisilano (3-aminopropil)
DPBS 10x	Pan Biotecnología	P04-53-500	Almacenado a 4 °C
Matraz 75 cm²	halcón	10497302
HBSS	sigma	H8264-500ML
Heparina sódica	sigma	H3149-100KU	Almacenado a 4 °C
Laminina		114956-81-9	Favorece la adhesión neuronal
Matraz 75 cm²	halcón	10497302
Heparina sódica	sigma	H3149-100KU	Almacenado a 4 °C
Software Leonardo			Carga de micropatrones previstos
Software MetaMorph	Dispositivos Moleculares LLC	Na	Software de automatización de microscopía
Metilcelulosa	sigma	M0512	Diluido en NBM para una concentración final del 2%
Medio neurobasal	Gibco	21103-049	Almacenado a 4 °C
Nikon TiE (S Fluor, 20x/0.75 NA)			Microscopio invertido equipado con una platina motorizada
Penicilina - Estreptomicina	Gibco	Números 15140-122	Almacenado a 4 °C
PLPP	Alveole		Fotoiniciador utilizado para degradar el cepillo PEG
Valerato de poli(etilenglicol)-succinimidilo (mPEG-SVA)	Biografía de Laysan	VA-PEG-VA-5000-5g	Se utiliza como recubrimiento antiincrustante
Tripsina-EDTA	sigma	T4049-100ML	Se utiliza para separar las células adherentes