Inactivación de genes diana basada en el sistema CreER-LoxP: un sistema de recombinasa Cre inducible por tamoxifeno para la eliminación de genes diana en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Hübner, E. K., et al. Sistemas constitutivos e inducibles para la modificación genética in vivo de hepatocitos de ratón mediante inyección hidrodinámica de venas de cola.J. Vis. Exp. (2018)

Este video describe un procedimiento para la eliminación del gen diana utilizando un sistema de Cre-recombinasa inducible por tamoxifeno después de la inyección intraperitoneal de tamoxifeno en un modelo de ratón.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Inducción de CreER transfectado con tamoxifeno

>PRECAUCIÓN: El tamoxifeno es dañino, puede ser canceroso o dañar la fertilidad. Consulte la ficha de datos de seguridad.

1. Planifique las inyecciones intraperitoneales de tamoxifeno en tres días consecutivos.
2. El día 1, disuelva 10 mg de tamoxifeno en 40 μL de etanol. Incubar a 55 °C durante 10 min. Vórtice varias veces hasta que el tamoxifeno se haya disuelto.
3. Agrega 960 μL de aceite de maíz. Incubar durante 5 minutos a 55 °C. Vortex varias veces para obtener una solución clara.
4. Prepare la solución en una jeringa de insulina de 1 ml con una aguja de 27 G.
5. Frote el ratón agarrando el cuello del ratón con cuidado con el pulgar y el segundo dedo, fijando la cola entre la base de la mano y el cuarto y quinto dedo.
6. Inyectar 0,1 mL (= 1 mg de tamoxifeno) de la solución por vía intraperitoneal en el cuadrante inferior izquierdo del abdomen.
7. Repita las inyecciones los días dos y tres.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Jeringa Injekt F 1 ml	Braun	9166017V	Para inyección intraperitoneal
Tamoxifeno	Sigma-Aldrich	T5648-1G	Para la activación de CreER
Aceite de maíz	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	Portador para inyecciones de tamoxifeno