Técnicas de edición genómica

Este video explica el concepto de editores de bases de citosina mediados por CRISPR para inducir la sustitución de nucleótidos dirigidos.

En este video, demostramos la edición del genoma basada en CRISPR-Cas9 todo en uno en células cultivadas donde Cas9 y sgRNA se proporcionan como una sola construcción de plásmido a las células. El sistema CRISPR-Cas9 y el gen deseado a insertar se introdujo en las células mediante la técnica de electroporación para facilitar el éxito de la edición de genes.

Este video demuestra una técnica de edición del genoma basada en nucleasas de dedos de zinc en células madre pluripotentes humanas (hPSCs). Dado que las hPSC pueden diferenciarse potencialmente en varios tipos de células, esta tecnología es útil para estudios patológicos y farmacológicos in vitro de manera específica para cada paciente.

Este video describe una técnica precisa de edición del genoma en células madre pluripotentes inducidas humanas, o hiPSCs, que utilizan TALEN para crear roturas de doble cadena en un locus específico, induciendo la reparación dirigida por homología para la integración de genes de proteínas de fluorescencia.

En este vídeo, demostramos la integración de transgenes específicos del sitio mediada por phiC31 en el embrión de Anopheles mediante microinyección. Este método ayuda a introducir los genes deseados en un sistema huésped para aplicaciones industriales y de investigación.

En este video, demostramos la generación de plantas transgénicas de Arabidopsis que expresan un transgén estable a través de la transformación de genes basados en cromosomas artificiales bacterianos binarios mediados por Agrobacterium.

En este video, demostramos un procedimiento para generar una línea transgénica estable de pez cebra que expresa constitutivamente una proteína indicadora de voltaje fluorescente después de la coinyección del sistema de transposón Tol2 que comprende el ARNm de la transposasa y la construcción del transposón Tol2 que codifica el indicador de voltaje fluorescente.

Este video muestra el procedimiento para generar neuronas motoras mediante la transfección de iPSCs humanas con el sistema de transposones PiggyBac mediante la expresión ectópica de factores de transcripción específicos del linaje.

Este video muestra un silenciamiento génico basado en interferencias CRISPR en Leptospira patógena. La represión dirigida de la expresión génica mediante un sistema CRISPR/Cas que bloquea la formación de ARNm ayuda a identificar genes candidatos para estudios patológicos y farmacológicos.

Este video describe un procedimiento para la eliminación del gen diana utilizando un sistema de Cre-recombinasa inducible por tamoxifeno después de la inyección intraperitoneal de tamoxifeno en un modelo de ratón.

Este video describe una técnica de eliminación de genes que utiliza un concatemero CRISPR para eliminar simultáneamente múltiples genes en células organoides intestinales de ratón cultivadas. Este método se utiliza para eliminar un gen enfermo y para dilucidar la función de un gen y sus parálogos.

En este video, demostramos un método para realizar la transducción de vectores lentivirales de shRNA para obtener líneas celulares knockdown estables en células madre y progenitoras hematopoyéticas inmortalizadas (iHSPCs).

Este video muestra el sistema de expresión génica de tetraciclina, o Tet-On, en un modelo de ratón. En presencia de doxiciclina, un derivado de la tetraciclina, el sistema Tet-On que consiste en una proteína transactivadora controlada por tetraciclina inversa se activa y expresa el gen de interés.

En este video, describimos un procedimiento para realizar la transfección inversa de siRNA en adipocitos para modular la expresión de una proteína diana.

Este video describe el método de regulación de la expresión génica en células cultivadas mediante transfección con un plásmido que contiene un gen de interés y un plásmido regulador. La expresión de este plásmido puede ser controlada por tetraciclina o sus análogos sintéticos, lo que convierte a este sistema en un modelo útil para estudiar la expresión génica regulable.

Este video describe una técnica de eliminación de genes que utiliza morfolinos bloqueadores traslacionales microinyectados en la etapa unicelular del pez de cueva. Los morfolinos son oligonucleótidos de ADN que se unen a la secuencia complementaria del ARNm diana y bloquean su traducción a una proteína. En consecuencia, los morfolinos se utilizan como herramientas moleculares para detener o reducir la expresión de un gen de forma transitoria.