Expresión génica inducible basada en el sistema regulable por Tet-On in vivo: un sistema de expresión génica inducido por tetraciclina para la activación de la transcripción de genes diana en un modelo de ratón

Resumen

Fuente: Hubner, E. K. et al.Sistemas constitutivos e inducibles para la modificación genética in vivo de hepatocitos de ratón mediante inyección hidrodinámica de venas de cola. J. Vis. Exp. (2018)

Este video muestra el sistema de expresión génica de tetraciclina, o Tet-On, en un modelo de ratón. En presencia de doxiciclina, un derivado de la tetraciclina, el sistema Tet-On que consiste en una proteína transactivadora controlada por tetraciclina inversa se activa y expresa el gen de interés.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Inducción de la expresión de genes o shRNA dependientes de tetraciclina

>PRECAUCIÓN: La doxiciclina puede ser perjudicial. Consulte la ficha de datos de seguridad.

NOTA: Dependiendo del tipo y la duración del experimento, la doxiciclina se puede suministrar en el agua potable.

1. Para experimentos a corto plazo (<10 días) administrar doxiciclina a través del agua potable utilizando el siguiente protocolo.
   1. Disuelva 5 g de sacarosa en 100 ml de agua del grifo. Autoclave.
   2. Disolver 100 mg de hiclato de doxiciclina en 5 ml de solución de sacarosa (paso 1.1.1) en un tubo cónico de 15 ml.
   3. Con una jeringa de 10 ml, filtre la solución estéril a través de un filtro de 0,2 μm. Añadir a la solución de sacarosa preparada en el paso 1.1.1.
   4. Suministre la solución de doxiciclina-sacarosa como agua potable al ratón. Revise diariamente y reemplácela cuando la solución se vuelva turbia, lo que indica un crecimiento excesivo de bacterias (reemplace la solución clara después de tres días a más tardar).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
D(+)-Sacarosa	Carl Roth	4621.1	Para el endulzamiento de la solución de doxiciclina
Hiclato de doxiciclina	AppliChem	A2951,0025	Activación de la expresión dependiente de tetraciclina
Jeringa Injekt 10 ml	Braun	4606108V
Filtropur S 0.2	Sarstedt	831.826.001	Para la filtración de doxiciclina