Transgénesis del pez cebra mediada por transposones Tol2: un procedimiento para generar peces cebra transgénicos tras la coinyección del sistema Tol2 en embriones fertilizados de pez cebra

Resumen

Fuente: Silic, M. R., et al. Visualización de la actividad eléctrica celular en embriones tempranos y tumores de pez cebra. J. Vis. Exp. (2018)

En este video, demostramos un procedimiento para generar una línea transgénica estable de pez cebra que expresa constitutivamente una proteína indicadora de voltaje fluorescente después de la coinyección del sistema de transposón Tol2 que comprende el ARNm de la transposasa y la construcción del transposón Tol2 que codifica el indicador de voltaje fluorescente.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Microinyección

1. Instale de 4 a 6 tanques de cría con al menos 2 machos y 2 hembras la tarde antes de la inyección. Estos peces no deben ser alimentados por la tarde. Este paso reducirá la cantidad de desechos de peces y ahorrará tiempo para limpiarlos a la mañana siguiente, al mismo tiempo que ayudará a inducir una respuesta de reproducción.
A
2. la mañana siguiente, retire la solución inyectable preparada compuesta por: (i) una ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Agarosa RA	Amresco	N605-500G	Para la fabricación de los geles inyectables
Osciloscopio de disección de campo claro	Nikon	SMZ 745	Decorionación, microinyección, montaje
Pipeta de transferencia desechable 3,4 ml	Termo Científico	13-711-9AM	Embriones de peces y transferencia de agua
Pinzas #5	WPI (en inglés	500342	Decorionación y rotura de agujas
Sugerencia de carga	Eppendorf	930001007	Para cargar la solución inyectable en agujas capilares
Molde de microinyección	Herramientas de ciencia adaptativa	AT-1	Para preparar una bandeja de molde de agaorse para contener embriones de pescado durante la inyección
Microinyector	WPI (en inglés	Picobomba neumática PV820	Inyector de microinyección
Micro-manipulador	WPI (en inglés	Microinyector MM3301R	Operación de microinyección
Extractor de micropipetas	Instrumento Sutter	P-1000	Para la preparación de la aguja capilar
Aceite mineral	Amresco	J217-500ml	Para calibrar el volumen de inyección
Placas de Petri de plástico	VWR	25384-088	Para sujetar peces o embriones de peces durante el proceso de obtención de imágenes
Micrómetro de etapa	Am Alcance	MR100	Calibración del volumen de microinyección
Capilares de vidrio de pared delgada	WPI (en inglés	TW100F-4	Vidrio en bruto para hacer aguja cappilar

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