Ensayo de impedancia basado en matrices de tres cámaras: una técnica de análisis en tiempo real para evaluar el potencial invasivo de las células cancerosas mediante la medición de la impedancia eléctrica

Resumen

Fuente: Sharif, G. M. et al., Detección y captura en tiempo real de subpoblaciones de células invasoras a partir de cocultivos. J. Vis. Exp. (2022).

Este video describe un ensayo de invasión utilizando una matriz de tres cámaras basada en la impedancia eléctrica. Esta técnica mide el potencial invasivo de las células cancerosas bajo la influencia de factores solubles secretados por las células estromales residentes en microambientes tumorales.

Protocolo

1. Nuevo diseño de la cámara (Figura 1)

1. Abra una nueva placa analizadora de células de doble cámara. Deje a un lado la cámara superior con electrodos.
2. Con una fresadora, corte 2 mm de los pocillos inferiores en forma de U de la placa del analizador de células.
3. Fije una membrana de polietersulfona (PES) de 2 cm x 7 cm con un tamaño de poro de 0,2 μm en el fondo de los pocillos afeitados con adhesivo curado con UV. Espere 30 minutos de curación para asegurarse de que el pegamento esté completamente curado e inerte.
4. Con una fresadora, corte dos ranuras longitudinales (1,5 mm x 5,6 mm) a lo largo de los lados para encajar en las c....

Resultados

Figura 1: Imágenes de las cámaras del array y modificaciones.

(A) Las tres cámaras utilizadas para construir el conjunto. No se realizó ninguna modificación en la cámara superior que alberga los electrodos. (B) De los pozos de la cámara central, se ha afeitado una altura de 2 mm y se ha unido una membrana al fondo abierto; Se añadieron ran.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
0,05% Tripsina-EDTA	Termopescador	25300-054
adhesivo	Adhesivo óptico Norland	NOA63
Albúmina sérica bovina (BSA)	sigma	A9418
Elevador de células	Sarstedt	83.1832
Toxina del cólera por Vibrio cholerae	Termopescador	12585-014
Placa CIM	Agilent 5665817001		Placa analizadora de células
Colagenasa de Clostridium histolyticum	sigma	C0130
DMEM	Termopescador	11995-065
DMEM-F12	Termopescador	11875-093
Suero fetal bovino (FBS), inactivado por calor	Omega Científico	FB-12
HEPES	Termopescador	15630106
Suero de caballo (HS)	Gibco	16050-122
EGF humano	Peprotech	AF-100-15
hidrocortisona	sigma	H4001
Transferencia de insulina elanio etanolamina (ITSX) (100x)	Termopescador	51500056
Insulina Recombinante Humana, Solución de Zinc	sigma	C8052
Fibroblastos J2	Célula madre (RRID:CVCL_W667)	100-0353
LymphoPrep	Célula madre	7851	Medio de gradiente de densidad para el aislamiento de células mononucleares
Matrigel	Corning	354230	Matriz de membrana basal
MCFDCIS.com células ( CDIS)	RRID:CVCL_5552
Células MDA-MB-231	RRID:CVCL_0062
fresadora			Bridgeport Serie 1 Vertical
Solución salina tamponada con fosfato (1x)	Termopescador	10010049
Membrana de polietersulfona (PES)	Sterlitech	PCTF029030
Solución de lisis de glóbulos rojos	Célula madre	7800
Analizador RTCA DP	Agilent	3X16	Analizador de células de doble propósito
tripsina	sigma	T4799