A Matrigel basado en tubo de ensayo de formación para evaluar la actividad de las células tumorales vasculogénica

Resumen

Un ensayo de la formación del tubo se utiliza para evaluar la actividad vascular de las células tumorales.

Resumen

Durante las últimas décadas, un ensayo de la formación del tubo con el factor de crecimiento reducido Matrigel ha sido generalmente empleado para demostrar la actividad angiogénica de las células endoteliales vasculares in vitro ^1-5. Sin embargo, evidencia reciente ha demostrado cada vez que este ensayo no se limita a probar el comportamiento de las células endoteliales vasculares. Por el contrario, también se ha utilizado para poner a prueba la capacidad de un número de células tumorales a desarrollar un fenotipo vascular ^6-8. Esta capacidad fue consistente con su comportamiento vasculogénica identificado en animales xenotransplantado, un proceso conocido como vasculogénica mímica (VM) ^9. Hay una gran cantidad de evidencias que demuestran que las células tumorales mediada por VM juega un papel vital en el desarrollo del tumor, con independencia de la angiogénesis de las células endoteliales ^{6, 10-13.} Por ejemplo, las células tumorales se encuentran para participar en la sangre perfunde la formación, el canal vascular en muestras de tejido de pacientes con melanoma y glioblastoma ^{8, 10, 11.} En este sentido, este ensayo se describe la red tubular como una herramienta útil en la evaluación de la actividad vasculogénica de las células tumorales. Hemos encontrado que algunas líneas celulares tumorales como el melanoma B16F1 células, las células de glioblastoma U87, y el cáncer de mama MDA-MB-435 células son capaces de formar túbulos vasculares, pero algunos no lo hacen, como el cáncer de colon HCT116 células. Además, este fenotipo vascular depende de el número de células chapada en el Matrigel. Por lo tanto, este ensayo puede servir de gran utilidad para detectar el potencial vascular de una variedad de tipos de células incluyendo las células vasculares, las células tumorales, así como otras células.

Protocolo

1. A Matrigel basado en tubo de ensayo de formación para evaluar la actividad de las células tumorales vasculogénica

1. Preparación de las células tumorales y las células endoteliales microvasculares: las células de tumores cerebrales, tales como U87 células, las células del melanoma B16F1, el cáncer de mama MDA-MB-435, y las células del colon HCT116 fueron cultivadas en DMEM suplementado con FBS al 10% y penicilina / estreptomicina (todos de Invitrogen ). Línea de células endoteliales humanas células endoteliales microvasculares (HMVECs) se cultivaron en medio EBM2 (Lonza), complementado con 1 mg / ml de hidrocortisona y 1 ng / ml de factor de crecimiento ep....

Discusión

A fin de que este ensayo tenga éxito, la calidad de Matrigel debe ser probado por primera vez. Una pequeña muestra se puede obtener de BD Bioscience de pre-ejecución del ensayo utilizando HMVECs. Diferentes productos por lotes puede mostrar cualidades diferentes en los que algunos lotes no ofrecen condiciones óptimas para la formación del tubo. En segundo lugar, las burbujas deben ser evitados cuando una parte alícuota de Matrigel se carga en placas de 96 pozos, porque las burbujas pueden alterar la formación de túbulos.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo
DMEM	Invitrogen	11995
FBS	Invitrogen	16000-044
El factor de crecimiento reducido Matrigel	BD Bioscience	47743-720
EBM2 kit	Lonza	CC-3156
Nikon Eclipse TS100 microscopio	Nikon