Ensayo de parálisis fluorescente basado en reporteros: una técnica para evaluar la formación progresiva asociada a la edad de poliglutamina fluorescente reportera y la parálisis asociada en Caenorhabditis elegans

Resumen

Fuente: Lázaro-Peña, M. I. et al. Cuantificación del deterioro proteostático específico del tejido en Caenorhabditis elegans.J. Vis. Exp. (2021)

Este video muestra un ensayo basado en imágenes in vivo para determinar la disminución de la proteostasis debido al envejecimiento. El ensayo utiliza Caenorhabditis elegans que expresa la proteína de fusión de poliglutamina YFP en los músculos de la pared corporal para medir la agregación de poliglutamina asociada a la edad y la inducción de proteotoxicidad, lo que conduce a la parálisis.

Protocolo

1. Medición de la disminución de la proteostasis en el tejido muscular mediante el uso de animales que expresan poliglutamina

NOTA: Se pueden utilizar dos métodos para identificar la disminución de la proteostasis en las células musculares: obtener imágenes de la formación de agregados de proteínas durante el envejecimiento (1.1) y medir la proteotoxicidad que estos agregados causan con la edad hasta el inicio de la parálisis (1.2).

1. Imagen de la formación de agregados de poliglutamina en el músculo durante el envejecimiento
   nota: La progresión dependiente de la edad de la....

Resultados

Figura 1: La expresión de polyQ::YFP dentro del músculo de C. elegans da lugar a una acumulación progresiva de focos y parálisis durante el envejecimiento. (A) Expresión de C. elegans unc-54p::Q35::YFP en los días 1 y 4 de la edad adulta (panel superior e inferior, respectivamente). Las flechas indican focos representativos. (B) Cuantificac.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Portaobjetos de microscopio de vidrio	VWR	160004-422
Azida de sodio, CAS #26628-22-8	Sigma-Aldrich	S2002
Microscopio Zeiss Axio Imager M2m con software AxioVision v4.8.2.0	Zeiss
Microscopio Zeiss StemiSV11 M2 Bio Quad	Zeiss