Ensayo colorimétrico para la cuantificación de lactato en muestras de ensayo

Resumen

Fuente: Yanase, S., et al. Ensayos colorimétricos a pequeña escala de lactato y piruvato intracelulares en el nematodo Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2018).

Este video describe un ensayo colorimétrico para la medición de lactato en lisados celulares mediante el uso de la enzima lactato deshidrogenasa. Esta enzima convierte el lactato en piruvato, junto con la conversión de NAD en NADH que reacciona con los colorantes de tetrazolio y da un producto coloreado que se puede medir espectrofotométricamente para cuantificar el lactato.

Protocolo

1. Cultivo sincronizado de C. elegans

1. Antes de la siembra, cultive la cepa OP50 de Escherichia coli (E. coli) durante la noche a 37 °C en 300 mL de medio líquido de caldo Luria-Bertani (LB). Almacene el OP50 cultivado a -4 °C.
   1. Para hacer un medio líquido de caldo LB, use 10 g de triptona, 5 g de extracto de levadura, 10 g de NaCl y 1,5 mL de NaOH 1 N, y agregue 1 L con agua desionizada. Autoclave.
      nota: Las cepas OP50 y C. elegans están disponibles en el Centro de Genética de Caenorhabditis (Universidad de Minnesota, St. Paul, MN, EE. UU.).
2. Para hacer agar medi....

Resultados

Figura 1. Proceso para la extracción de metabolitos celulares. (A) Se colocaron entre 1.500 y 3.000 gusanos en una placa de agar NGM (placa de Petri de 90 mm). La extracción de gusanos en cinco placas fue suficiente para los ensayos colorimétricos. (B) Los gusanos recolectados de las cinco placas de 3,000 y 1,500 gusanos por placa se indican en el la.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Kit de ensayo colorimétrico/fluorimétrico de lactato	BioVisión	#K607-100	colorimétrico/fluorimétrico 100 ensayos; Almacenar a -20oC
ácido tricloroacético	Wako Químico Puro	#207-04955	Almacenar a temperatura ambiente
Homogeneizador de teflón	Iwaki/Pyrex	#358034 (Wheaton)	En lugar de Iwaki/Pyrex disponible por Wheaton