Ensayo basado en luminiscencia para evaluar la neurotoxicidad de los compuestos de ensayo en las neuronas

Resumen

Fuente: Wahlestedt, C., et al., A Ensayo de excrecimiento de neuritas y evaluación de neurotoxicidad con neuronas derivadas de células progenitoras neurales humanas. J. Vis. Exp. (2020)

En este video, describimos un método basado en luminiscencia para evaluar la neurotoxicidad de los compuestos de moléculas pequeñas promotores del crecimiento de neuritas en la viabilidad de las neuronas derivadas de hNPC. El ensayo mide el nivel de ATP intracelular, un indicador de la viabilidad celular, para evaluar la neurotoxicidad después del tratamiento con compuestos de ensayo.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las pautas institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local

1. Aislamiento y cultivo de células progenitoras neurales humanas (hNPCs)

1. Coloque el tejido cerebral en una placa de Petri de 100 mm y retire con cuidado las meninges con pinzas.
2. Transfiera el tejido cerebral a un tubo cónico de 50 mL y lávelo dos veces con 20 mL de PBS invirtiendo suavemente el tubo.
3. Incubar el tejido cerebral en un nuevo tubo cónico de 50 mL sumergiendo....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Antibiótico-Antimicótico	Gibco	15240062
B27	termo	17504001
B27 - menos vitamina A	termo	12587010
BDNF	PeproTech	450-02
Bsa	sigma	A8531
CellTiter-Glo	Promega	G7572
CoolCell (Celda fría	Corning	432000	Contenedores de congelación celular que garantizan una velocidad controlada estandarizada de -1 °C/minuto de congelación celular en un congelador de -80 °C
CryoStor CS10	Tecnologías StemCell	7930	Medio de criopreservación que contiene un 10% de DMSO
DMEM/F12	Gibco	11320033
Dmso	sigma	34869-100ML
FEAG	Gibco	PHG0311
FGF	Gibco	PHG6015
GDNF (en	PeproTech	450-10
Glutamax	Gibco	35050061	Suplemento de L-alanil-L-glutamina
heparina	Calbiochem	375095
Laminina	sigma	L2020-1MG
Ácido L-ascórbico	sigma	A92902-25G
mFreSR	Tecnologías StemCell	5854	Medio de criopreservación sin suero diseñado para la criopreservación de células madre pluripotentes embrionarias e inducidas humanas
N2	Gibco	17502048
Microplacas de poliestireno blanco Nunc de 384 pocillos	termo	164610
Pbs	termo	10010-049
Poli-L-lisina	sigma	P5899-5MG
StemPro Accutase	Gibco	A1110501	Reactivo de disociación celular que contiene enzimas proteolíticas y colagenolíticas
Medio Neurobasal	Gibco	21103049

) inglés)