Tecnología de interferometría de biocapas para detectar interacciones entre ligando y analito

Abstract

Fuente: Desai, M., et al. Aplicación de la interferometría de biocapas (BLI) para el estudio de las interacciones proteína-proteína en la transcripción. J. Vis. Exp. (2019)

En este video, demostramos la tecnología de interferometría de biocapas (BLI) para detectar las interacciones intermoleculares entre ligandos y analitos objetivo en tiempo real. BLI mide los cambios en el patrón de interferencia de la luz blanca reflejada por una capa de ligandos inmovilizados en la superficie de un biosensor a medida que interactúan con los analitos en solución.

Protocol

1. Hidratación con biosensores y configuración de ensayos

1. Encienda la máquina BLItz.
2. Asegúrese de que la máquina esté conectada a la computadora a través de un puerto de salida de datos USB en la parte posterior de la máquina.
3. En la computadora, abra el software asociado (por ejemplo, BLItz Pro) y haga clic en Advanced Kinetics en el lado izquierdo de la pantalla.
4. En el software, escriba toda la información apropiada sobre el experimento (incluido el nombre del experimento, la descripción, la identificación de la muestra y la concentración de proteínas) debajo de cada encabezado respectivo.
5. Haga clic....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Máquina BLItz	ForteBio	45-5000	dispositivo
Bandeja de biosensor de Ni-NTA de inmersión y lectura	ForteBio	18-5101	Biosensores de Ni-NTA listos para usar para proteínas marcadas con poli-His
Soporte de caída	ForteBio	45-5004	dispositivo
Tubos de PCR (0,2 mL)	Thomas Científico	CLS6571	Artículos de plástico
Tubos de microcentrífuga (negros)	Thermo Fisher Scientific	03-391-166	Artículos de plástico
Toallitas Kimwipes	Thermo Fisher Scientific	06-666A	Artículos de plástico
TDT	Thermo Fisher Scientific	R0861	químico
EDTA	MilliporeSigma	E6758	químico
MgCl2	MilliporeSigma	M8266	químico
NaCl	MilliporeSigma	S9888	químico
Tris-HCl	Biografía de oro	T095100	búfer