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Artículo de método

Microscopía de lámina de luz reticular para visualizar las interacciones receptor-ligando en células vivas

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Rosenberg, J., et al. Visualización de la dinámica del receptor de células T de superficie en cuatro dimensiones utilizando microscopía de lámina de luz reticular . J. Vis. Exp. (2020).

En este video, describimos la técnica de microscopía de lámina de luz reticular para visualizar las interacciones entre las células T vivas y las células presentadoras de antígenos. El método consiste en enfocar una lámina de luz reticular ultradelgada en un par de células que interactúan para obtener una serie de imágenes bidimensionales, que se combinan para obtener imágenes cuatridimensionales de alta resolución que revelan la dinámica espacio-temporal de la interacción célula-célula.

Protocolo

1. Realización de la alineación diaria de LLSM

NOTA: (Importante) Este protocolo de alineación se basa en el instrumento LLSM utilizado (ver la Tabla de Materiales). Cada LLSM puede ser diferente y requerir diferentes estrategias de alineación, especialmente aquellas que son construidas en casa. Lleve a cabo la alineación de rutina adecuada y continúe con la sección 2.

  1. Agregue 10 ml de agua más 30 μl de fluoresceína (1 mg/ml de caldo) al baño LLSM (~10 ml de volumen), presione Imagen (Inicio) para mover el objetivo a la posición de la imagen y observe un solo patrón de rayo láse....

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Resultados

figure-results-1
Figura 1: Alineación de LLSM. (A) Diagrama de haz deseado para el experimento de imágenes de LLSM. (B) Captura de pantalla del proceso de alineación de vigas; a la izquierda está la ventana de enfoque que muestra el haz reducido y enfocado; En la parte superior derecha hay un gráfico que muestra que el haz está centrado dentro de la ventana; En la parte inferior derecha está la cáma.......

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Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cubreobjetos redondos de 5 mmInstrumentos de precisión mundial502040Para la obtención de imágenes
Alexa Fluor 488 anti-ratón TCR β cadena AnticuerpoBioLeyenda109215Para la obtención de imágenes
Sal sódica fluoresceínaSigma-AldrichF6377Para la alineación del microscopio
Microesferas modificadas con carboxilato FluoSpheresThermo Fisher ScientificF8810Para la alineación del microscopio
ImarisPlano de bitsN/Asoftware de seguimiento; Otras opciones de software de rastreo incluyen Amira o Trackmate (Fiji).
Microscopio de lámina de luz de celosía3iN/AMicroscopio utilizado
Leibovitz's L-15 Medium, sin rojo fenolThermo Fisher Scientific21083027Para la obtención de imágenes
Libro de diapositivas3iN/ASoftware de imagen LLSM
Poli-L-Lisina Productos de investigación Phenix P8920-100ML Para la obtención de imágenes

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