Cuantificación de la formación de ondulaciones en la membrana mediante microscopía electrónica de barrido

Abstract

Fuente: Ahn, W. et al., Visualización de la formación de ondulaciones en la membrana mediante microscopía electrónica de barrido.J. Vis. Exp. (2021)

Este video muestra la preparación de muestras, la fijación y la obtención de imágenes de una célula de macrófagos que muestra ondulaciones en la membrana utilizando microscopía electrónica de barrido, SEM. La información detallada sobre la morfología y organización de la membrana es crucial para comprender la condición fisiológica de las células.

Protocol

1. Línea celular y cultivo celular

1. Cultive macrófagos RAW 264.7 en el Medio Eagle Modificado (DMEM) de Dulbecco suplementado con un 10% (vol/vol) de suero fetal bovino (FBS) inactivado por calor, 100 UI/mL de penicilina y 100 μg/mL de estreptomicina en una incubadora humidificada a 37 °C y 5% de CO₂. Reemplace los medios de crecimiento cada dos días.
2. Cuando las células confluyan en un 80%, lave la placa dos veces con PBS estéril.
3. Separe las células añadiendo 1.000 μL de tripsina-EDTA al 0,5% e incube la placa de cultivo celular durante 3-5 min en una incubadora humidificada a 37 °C.
4. Examine la placa....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,5% Tripsina-EDTA	Gibco	15400-054
2% Glutaraldehído	Ciencias de la Microscopía Electrónica	16320
4% Paraformaldehído	Biotecnología de Santa Cruz	281692
5-(N-etil-N-isopropil)-amilorida	Sigma Ciencias de la Vida	A3085
Lengüetas adhesivas de carbono	Ciencias de la Microscopía Electrónica	77825-09
Dimetilsulfóxido	Corning	25-950-CQC
Dulbecco's Modified Eagle Medio	Cytiva Ciencias de la Vida	SH30022.01
Placa de cultivo celular múltiple con tratamiento TC de fondo plano transparente Falcon de 24 pocillos	halcón	353047
Suero Fetal Bovino	Biografía de Géminis	900-108
Incubadora de CO2 HERAcell 150i	Thermo Fisher Scientific	51026282
Hummer Modelo 6.2 Recubrimiento por pulverización catódica	Anatech Estados Unidos	58565
Microscopio electrónico de barrido JSM-IT500HR
Cubierta de vidrio para microscopio	Thermo Fisher Scientific	Teléfono 12-545-82
Estreptococo de la pluma	Gibco	Números 15140-122
Forbol 12-miristato 13-acetato	Millipore Sigma	524400
Macrófago RAW 264.7	ATCC	ATCC TIB-71
M-CSF humano recombinante	Peprotech	300-25
Samdri-790 Secadora de Punto Crítico	Corporación de Investigación Tousimis	8778B
Montajes de muestras de aluminio SEM	Ciencias de la Microscopía Electrónica	75220
Cacodilato de sodio	Ciencias de la Microscopía Electrónica	12300
Solución de Trypan Blue	Thermo Fisher Scientific	15250061