Análisis de la relación antigénica entre virus mediante un ensayo de microneutralización basado en imágenes

Abstract

Fuente: Lin, Y., et al. Optimización de un ensayo cuantitativo de microneutralización. J. Vis. Exp. (2016)

Este video muestra el ensayo de microneutralización basado en imágenes para analizar las relaciones antigénicas entre los virus de la influenza A y B. Proporciona una forma cuantitativa y visual de evaluar la eficacia de los anticuerpos u otros tratamientos en la prevención de la infección viral.

Protocol

1. Titulación de virus

>NOTA: Dependiendo del número de virus y del número de duplicados, se puede configurar una placa de pocillos con las siguientes flexibilidades: (1) La dilución viral puede disponerse a lo largo de las filas o de las columnas (Figura 1). Cada virus debe ocupar una fila/columna separada. (2) El incremento de dilución viral es flexible, pero debe comenzar con la concentración viral más alta en la esquina superior izquierda. (3) No hay restricción en el número de duplicados.

1. Alícuota suficientes células MDCK o células MDCK-SIAT8 en placas de 96 pocillos (200 μl....

Results

Figura 1: Ejemplo de una configuración de placa de pocillo en un experimento de valoración de virus. Los virus de prueba se asignan a filas separadas (de la A a la H). Las columnas están diseñadas para diferentes diluciones virales (1 a 12). Se utilizaron dos columnas como duplicados para cada dilución viral. Barra de escala = 10 mm.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
VGM	sigma	D6429, P0781	500 ml DMEM+5 ml Pluma/Strepb
PBS A			Solución salina tamponada con fosfato: NaCl 10 g, KCl 0,25 g, Na2HPO4 1,437 g, KH2PO4 0,25 g y Dist. Water 1 L
Avicell	Fmc	RC-581F	2,4 g en 100 ml de agua destilada disuelta por agitación en un agitador magnético durante 1 hora. Esterilizar en autoclave
2x DMEM	Gibco	21935-028
tripsina	sigma	T1426
Superposición (10 ml/plato):			5 ml 2x DMEM, Tripsina 2 μg/ml concentración final, Avicell 5 ml
Tritón X- 100 e	sigma	T8787	Tampón de permeabilidad: 0,2% en PBS A (v/v)
Preadolescente 80	sigma	P5188	Tampón de lavado: 0.05% Tween 80 en PBS A (v/v)
Suero de caballo	PAA Labs Ltd	B15-021	Tampón ELISA: 10% en PBS A (v/v) + 0,1% Tween 80
MAb de ratón contra la gripe tipo A	Biorad	MCA 400	1º Anticuerpo: 1:1.000 en tampón ELISA
Cabra anti-ratón IgG (H+L) HRP conjugado	Biorad	172-1011	2º Anticuerpo: 1:1.000 en tampón ELISA
Sustrato de peroxidasa Blu	KPL	50-78-02	Sustrato: Azul verdadero +0,03% H2O2 g (1:1.000 de solución al 30%)
Placas de microtitulación de fondo plano de 96 pocillos	Coprotagonista	3596
Arandela y colector de placas multipared de 8 canales	sigma	M2656
Escáner de placas Perfection	Epson	V750 Pro	El software de imagen se puede descargar gratuitamente desde http://www.epson.com/cgi-bin/ Store/support/supDetail.jsp? oid=66134&infoType=Descargas.
Entorno operativo de software: LabVIEW	Corporación Nacional de Instrumentos	Basado en ventanas con el constructor NI Vision	Versión: LabVIEW2012 o superior