| Etanol absoluto | Labchem | LB0507-9010 | Sin diluir |
| | | | Diluido al 90%, 70% y 50% en agua destilada |
Complejo avidina-biotina y peroxidasa
Vectastain Elite ABC kit Peroxidasa | Laboratorios de vectores | PK-6100 | Prepare y mezcle suavemente 30 minutos antes de usar de acuerdo con las instrucciones del kit. No mezclar después de reposar. |
| Anticuerpo secundario biotinilado (IgG H+L anti-ratón de caballo) | Laboratorios de vectores | BA-2000-1.5 | Diluir a 1/200 en TBS con un 10% de suero normal de caballo. Prepare el volumen requerido en función del número de secciones. |
| Cromógeno Diaminobencidina-DAB, kit de sustrato, Peroxidasa | Laboratorios de vectores | SK-4100 | Prepare antes de usar de acuerdo con las instrucciones del kit.
Utilice 400 μL de solución por sección. |
| Cámara de presión DakoCytomation Pascal | DAKO | S2800 | |
| Hematoxilina de Ehrlich: | | | |
| Etanol absoluto | Labchem | LB0507-9010 | |
| Ácido acético glacial | Merck | 101830 | |
| Alumbre potásico | Merck | 1.01047.1000 | |
| Glicerina | Merck | 1.04091.1000 | |
| Solución de bloque de peroxidasa endógena (concentración al 3% H2O2): | | | 40 mL de peróxido de hidrógeno (30% p/p) en 360 mL de metanol.
Preparar antes de usar |
| Peróxido de hidrógeno (30% p/p) | Scharlau | HI0136 | |
| metanol | Sigma Aldrich | 322415-2L | |
| Ácido fórmico 98% | Merck | 1.00264.1000 | Sin diluir |
| microtomo | Shandon-AS325 | microtomo | Shandon-AS325 |
Suero normal (20%) solución de bloqueo en TBS:
Suero normal de caballo | Gibco | 16050-122 | Prepare el volumen final de acuerdo con el número de secciones del ensayo
(200 μL de solución por sección). |
| Anticuerpo primario anti-PrP Ratón MAb 2G11 | BIORAD | MCA2460 | PrP 146-R154R171182
Ovinos, incluyendo tembladera atípica, cervino, felino. No apto para bovinos.
De acuerdo con el número de secciones en el ensayo (200 μL de solución por sección) y la dilución del anticuerpo, prepare el volumen final en TBS suplementado con 10% de suero normal de la especie en la que se crió el anticuerpo secundario (suero normal de caballo)
Dilución habitual de anticuerpos: MAb 2G11 1/100, pero se debe establecer una dilución de trabajo en cada nuevo lote para obtener la concentración que proporcione el etiquetado más fuerte con el fondo más bajo. Para el almacenamiento, congele volúmenes alícuotas de un mínimo de 10 μL en microtubos estériles. Descongele y use una alícuota a la vez. |
| Anticuerpo primario anti-PrP Ratón MAb 12F10 | Compañía Química de las Islas Caimán | 189710 | PrP142-160
Bovino, no apto para ovinos
Dilución habitual de anticuerpos: 1/200, pero también se debe establecer una dilución de trabajo. Prepárese como MAb 2G11 |
| Cámara Shandon CoverplateTM | Termo Científico | 72110017 | |
| Centro de inmunización Shandon Sequenza® | Termo Científico | 73300001 | |
| Shandon Sequenza® Bastidor portaobjetos inmunizante | Termo Científico | 73310017 | |
| Tampón de citrato en solución (10 mM pH 6,1): | | | 2,55 g de citrato trisódico dihidratado y 0,255 g de ácido cítrico en un litro de agua purificada.
Ajuste el pH de la solución de trabajo a 6,1 utilizando 10 mM de solución de ácido cítrico (1,05 g de ácido cítrico en 500 mL de agua purificada)
Prepárese el día del ensayo. |
| Citrato trisódico dihidratado | Sigma-aldrich | S4641-500G | |
| ácido cítrico | Sigma Aldrich | C0759 | |
| Tarro y cesta para manchar | Deltalab | Año 19360 | |
| | Año 19361 | |
| Portaobjetos de microscopio Superfrost Plus | VWR | 631-0108 | |
| Solución salina tamponada (TBS) (50 mM DE BASE TRIZMA; 0,8% NaCI; pH 7,6): | | | 10xTBS (solución madre 0,5 M BASE TRIZMA; 8% NaCI; pH 7,6):
TRIZMA BASE 60,57 g y NaCl 80 g en 800 mL de agua purificada. Ajustar el pH de la solución madre con ácido clorhídrico al 37% y el volumen final a un litro con agua purificada (mantener 5± 3 °C hasta 2 meses)
Diluya la solución madre TBS 1/10 el día del ensayo. |
| BASE TRIZMA | Sigma Aldrich | T6066-1KG | |
| Cloruro de sodio (NaCl) | Merck | 106404 | |
| xileno | Reactivos Panreac Applied Chem ITW | 251769 | Sin diluir |