Detección cuantitativa multiplexada de bacterias mediante microesferas magnéticas marcadas con colorantes

Abstract

Este video demuestra la detección cuantitativa de bacterias multiplexadas empleando microesferas de poliestireno magnético carboxilado teñidas en conjuntos distintos. El procedimiento abarca la formación de complejos de perlas y bacterias, la separación magnética y el análisis basado en flujo, lo que permite la cuantificación precisa y simultánea de múltiples bacterias en el mismo pozo de reacción.

Protocol

1. Acoplamiento covalente de anticuerpos de captura a microesferas MagPlex

Cada anticuerpo de captura se conjuga con un conjunto específico de microesferas magnéticas carboxiladas utilizando un procedimiento de dos pasos como se describe a continuación.

NOTA: También está disponible un kit de acoplamiento que incluye todos los reactivos, tampones y materiales necesarios para el acoplamiento de microesferas (consulte TABLA DE MATERIALES).

1. Vuelva a suspender la suspensión de microesferas desacoplada de acuerdo con las instrucciones descritas en la hoja....

Results

Figura 1: Flujo de trabajo de inmunoensayo sándwich de captura multiplexada. Se dispensa una mezcla multiplexada de microesferas acopladas a anticuerpos en cada pocillo y se añade la muestra. Después de la incubación durante 1 hora, se lavan las reacciones y se añaden los anticuerpos de detección biotinilados. Después de una incubación de 1 hora, las reacciones se lavan de nuevo y se.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microesferas MagPlex®	Luminex®	MC100xx-YY	Consulte el sitio web para conocer los números de catálogo individuales (https://www.luminexcorp.com/magplex-microspheres/#order)
Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL	Eppendorf™	22431081	Proteína LoBind®
0,1 M de fosfato sódico monobásico (NaH2PO4), pH 6,2	MilliporeSigma	S3139	Búfer de activación
Clorhidrato de 1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]carbodiimida (EDC)	Termo Científico™	Perforar™ 77149
N-hidroxisulfosuccinimida (Sulfo-NHS)	Termo Científico ™	Perforar™ 24510
Solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,4	MilliporeSigma	P3813	Tampón de acoplamiento
Kit de acoplamiento de anticuerpos xMAP®	Luminex®	40-50016	Kit opcional disponible para el acoplamiento de microesferas.
Anticuerpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	5310-0326	Policlonal, utilizado tanto para la captura como para la detección
Anticuerpo anti-Salmonella CSA-Plus	SeraCare	5310-0321	Policlonal, utilizado tanto para la captura como para la detección
Anticuerpo anti-Campylobacter spp.	SeraCare	5310-0324	Policlonal, utilizado tanto para la captura como para la detección
Anticuerpo anti-Listeria	SeraCare	5310-0319	Policlonal, específico del género, utilizado tanto para la captura como para la detección
PBS, pH 7,4 que contiene 0,02 % de Tween-20, 0,1 % de BSA, 0,05 % de azida de sodio (PBS-TBN)	MilliporeSigma	P3563 A7888 S8032	Se puede utilizar hasta un 1% de BSA
Anticuerpo anti-Escherichia coli O157:H7	SeraCare	5310-0326	Policlonal
(EZ-Link Sulfo-NHS-LC-Biotina) (Pierce).	Termo Científico™	A39257
E. coli O157:H7	SeraCare	5370-0013	Muerto por calor
Salmonella serotipo Typhimurium	SeraCare	5370-0002	Muerto por calor
Campylobacter jejuni	SeraCare	5370-0011	Muerto por calor
Listeria monocytogenes	SeraCare	5370-0010	Muerto por calor
Estreptavidina, conjugado de R-ficoeritrina (SAPE)	Termo Científico™	S866