Method Article

Supresión de la replicación del virus de la hepatitis B mediante linfocitos T específicos de antígenos virales

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Xiong, X., et al. Los linfocitos T específicos de Ag virales derivados de células madre suprimen la replicación del VHB en ratones. J. Vis. Exp. (2019).

El video muestra un ensayo que utiliza células T CD8+ derivadas de células madre pluripotentes inducidas humanas (iPSC) para inhibir la replicación del virus de la hepatitis B (VHB) en ratones. Estas células T, modificadas con receptores específicos del VHB, se transfieren a ratones transgénicos. A continuación, los plásmidos del genoma del VHB competentes para la replicación se inyectan directamente en el hígado, lo que permite la absorción del ADN viral. Una vez que los antígenos virales son expresados y presentados por moléculas híbridas MHC-I, las células T modificadas reconocen y se unen a estos complejos. Esto desencadena la liberación de moléculas citotóxicas, lo que resulta en la destrucción de las células hepáticas infectadas por el VHB y la supresión de la replicación viral.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el local
el comité institucional de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE. Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las pautas del IRB del instituto.

1. Generación de linfocitos T CD8+ específicos de Ag viral a partir de iPSCs (linfocitos T iPSC-CD8+)

  1. Creación de las construcciones retrovirales
    nota: Los genes α y β del receptor de células T (TCR) están relacionados con la secuencia de autoescisión ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Generación de linfocitos T iPSC-CD8+ específicos del virus del VHB Ag.

Las iPSCs de ratón se transducen con las siguientes construcciones retrovirales: HBs183-91 TCR (MiDR-s183 TCR) o OVA257–264 TCR (MiDR-OVA TCR), y las iPSCs transducidas se co-cultivan con células estromales OP9-DL1/DL4 para la diferenciación del linaje T. (A) Representación esquemát.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ratones HHDInstitut Pasteur, París, FranciaRatones HLA-A2.1-transgénicos (HHD) knockout de clase I H-2
iPS-MEF-NG-20D-17Banco de Células RIKENAPS0001
SNL76/7ATCCSCRC-1049
OP9ATCCCRL-2749
plásmido pAAV/HBV1.2Dr. Dr. Pei-Jer Chen (Hospital Universitario Nacional de Taiwán, Taiwán)Construcción de ADN del VHB
Genes TCR específicos de HBs183-91(s183) (FLLTRILTI)Dr. Adam J Gehring (Instituto de Investigación del Hospital General de Toronto, Toronto, Canadá)Genes TCR híbridos humano-murinos restringidos por A2 específicos de FLLLRILTI (Vα34 y Vβ28)
Genes TCR específicos de OVA257-264Dr. Dario A. Vignali (Universidad de Pittsburgh, PA)Genes TCR restringidos por H-2Kb específicos de SIINFEKL
Anticuerpo anti-CD3 (17A2)Bioleyenda100236
Anticuerpo anti-CD44 (IM7)BD Pharmingen103012
Anticuerpo anti-CD4 (GK1.5)Bioleyenda100408
Anticuerpo anti-CD8 (53-6.7)Bioleyenda100732
Anticuerpo anti-IFN-γ (XMG1.2)Bioleyenda505810
Anticuerpo anti-TNF-a (MP6-XT22)Bioleyenda506306
α-MEMInvitrogenA10490-01
Anticuerpo anti-HBsTermo FisherMA5-13059
Tampón de lisis ACKLonza10-548E
Brefeldin AsigmaB7651
DMEMInvitrogenABCD1234
FBSHycloneSH3007.01
Clasificador de células FACSAria FusionBd656700
gelatinaMilliporeSigmaG9391
Inhibidor de genesAgilent204130
Pentámero HLA-A201-HBs183-91-PEProinmuneF027-4A - 27
Anticuerpo secundario HRP anti-ratónInvitrogenA27025
mFlt-3LPeprotech250-31L
mIL-7PeprotechArtículo 217-17
Nucleasa S7Roche10107921001
ParaformaldehidoMilliporeSigmaP6148-500GPrecaución: Alergénico, cancerígeno, tóxico
Tampón de permeabilizaciónBioleyenda421002
PolibrenoMilliporeSigma107689
Mountant antidecoloración ProLong™ Gold con DAPIInvitrogenP36931
Kit de giro de virus QIAamp MinEluteQiagen57704

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatitis B VirusViral Antigen Specific T CellsiPSC Derived CD8 T CellsHydrodynamic Plasmid DeliveryHBV Genome PlasmidsTail Vein InjectionAntigen Presenting MoleculesCytotoxic Molecule ReleaseHBV Infected Liver CellsViral Replication Suppression

Related Articles