Un modelo de cocultivo tridimensional de células T infiltrantes en esferoides tumorales

Resumen

Fuente: Lin, Y., et al. Monitorización de la invasión de células cancerosas y la citotoxicidad de las células T en cultivo 3D. J. Vis. Exp. (2020).

Este video muestra un método para establecer un cocultivo tridimensional de esferoide tumoral y células T. Se prepara un molde de agarosa con micropocillos que contienen esferoides tumorales, seguido de la adición de células T. Después de la incubación, esta configuración permite estudiar la interacción de las células T con los esferoides tumorales en un entorno tridimensional controlado.

Protocolo

1. Generación de esferoides

1. Prepare y autoclave agarosa al 2% en 1x solución salina tamponada con fosfato (PBS) (por ejemplo, 1 g de agarosa en 50 mL de 1x PBS) y autoclave moldes de caucho de 35 y 81 micropocillos.
   cautela: Evite el uso de agarosa de bajo punto de fusión para generar los moldes de agarosa para el procesamiento de inmunohistoquímica (IHC).
2. Preparar moldes de agarosa
   NOTA: Los moldes de 35 micropocillos se utilizan para ensayos de invasión, inmunofluorescencia (IF) y aislamiento celular. Los cilindros de 81 micropocillos se utilizan para ensayos de citotoxicidad, IHQ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placas de Petri 3D	Microtejidos S.A	Z764019 y Z764051	denominados "moldes de caucho" en los protocolos; moldes de 81 y 35 micropocillos
Portaobjetos de cámara de 8 pocillos	Lab-Tek	154534
Agarosa Tipo I, EEO bajo	Sigma-Aldrich	A6013
DMEM, suero fetal bovino	ThermoFisher	11965092, 16000044	denominado "medio de cultivo celular" en los protocolos
RPMI	ThermoFisher	11875093	para medio de cultivo de células T

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