Purificación de nanopartículas de proteínas autoensamblables mediante cromatografía de afinidad

Abstract

Fuente: Karch, C. P. et al., Producción de nanopartículas de proteínas autoensamblables expresadas por E. coli para vacunas que requieren presentación de epítopos triméricos.J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra la purificación de nanopartículas de proteínas autoensambladas marcadas con histidina o SAPN utilizando cromatografía líquida de afinidad. Las fracciones de SAPN purificadas resultantes son adecuadas para el desarrollo de vacunas, lo que promete posibles aplicaciones inmunoterapéuticas.

Protocol

1. Expresión del núcleo de nanopartículas de proteínas autoensamblables que contiene un haz de seis hélices (SHB-SAPN) Proteína en E. coli BL21(DE3)

1. Mezcle 95 mL del componente A y 5 mL del componente B del medio en un matraz Erlenmeyer de vidrio estéril de 2 L según las instrucciones del fabricante (consulte la Tabla de materiales). Añadir ampicilina hasta una concentración final de 100 μg/mL.
2. Inocular el medio con E. coli a partir de un cultivo de glicerol previamente establecido. Incubar el cultivo a 30 °C con agitación a 200 rotaciones por minuto (rpm) durante 48 h.
   NOTA:

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-propanol	pescador	BP26181	4 L
ampicilina	pescador	BP1760-25	25 g
Filtro de vacío desechable/sistemas de almacenamiento de Corning	pescador	09-761-108	Una variedad de tamaños
Columnas preempaquetadas HisTrap HP de 5 mL de GE Healthcare	GE HealthCare	45-000-325	Paquete de 5
glicerol	pescador	BP229-4	4 L
imidazol	pescador	O3196-500	500 g
Magic Media E. coli Medio de expresión	ThermoFisher	K6803	1 L
MilliporeSigma Millex Jeringa Estéril 0.22 mm Filtros	Millipore	SLGV033RB	Paquete de 250
One Shot BL21 Star (DE3) E. coli químicamente competente	ThermoFisher	C601003	20 viales
Fosfato de sodio monobásico	pescador	BP329-500	500 g
Base Tris	pescador	BP152-1	1 kg
urea	pescador	BP169-500	2,5 kg
equipo
Rotor de ángulo fijo Fiberlite F14-14 x 50cy	ThermoFisher	096-145075	rotor
Sistema de cromatografía NGC Quest 10	BioRad	7880001	FPLC para ayudar en la purificación de proteínas
Sonifer 450	Branson	También conocido como 096-145075	Sonicador