Un ensayo in vitro para la detección de interferones como inhibidores potentes del crecimiento del virus del Zika

En este artículo

Resumen

Fuente: Contreras, D. et al., Sistema de cultivo celular infeccioso del virus del Zika y el efecto profiláctico in vitro de los interferones. J. Vis. Exp. (2016)

El video muestra un ensayo in vitro para la detección de interferones con actividad antiviral contra el virus del Zika, un patógeno humano. Dentro de la célula huésped, el virus del Zika se multiplica al internalizarse, infectando a las células vecinas y creando zonas distintas o placas virales. El interferón tipo I, que actúa como agente antiviral, dificulta la multiplicación del virus, evitando así la formación de placas virales en la monocapa de la célula huésped.

Protocolo

1. Detección de la biblioteca de citocinas contra la infección por el virus del Zika

Siembre células Vero ingenuas a 1 x 10⁵ celdas por pocillo utilizando una placa de 12 pocillos. Una vez que las células estén unidas (6 horas después de la siembra), agregue cada citocina a
Concentraciones indicadas en duplicados biológicos (2 ml volumen/pocillo). Incluir solo el control del vehículo (PBS).
A las 12 horas después del tratamiento, realice la infección viral por el virus del Zika (MOI de 0,1 en 400 μl por pocillo). Incluir pozos de control negativo sin infección (simulacro).
A las 4 horas después de la infección, reemplace el inóculo viral con medios tratados con citocinas (2 ml). Incubar las células a 37 °C durante 44 horas más.
A las 48 horas después de la infección, cuente las placas virales con un microscopio de contraste de fase y adquiera imágenes representativas de las células infectadas con un aumento de 40X (Figura 1).

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Resultados

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Figura 1: Los interferones demuestran una potente actividad viral contra el zika. (A) Gráfico que muestra la modulación del crecimiento viral del Zika por varias citocinas en comparación con la del control vehicular. Los valores medios y la desviación estándar se muestran en el gráfico de barras. Los interferones mostraron una inhibición estadísticamente significativ...