Un método para el tratamiento con alto contenido de sal de células dendríticas y su transferencia adoptiva a ratones

Resumen

Fuente: Van Beusecum, J. P., et al. Aislamiento y transferencia adoptiva de células dendríticas presentadoras de antígenos tratadas con alto contenido de sal. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra un procedimiento para la transferencia adoptiva de células dendríticas presentadoras de antígenos (CD) tratadas con alto contenido de sal a ratones. Las células dendríticas (CD) murinas CD11c+ se exponen a un medio que contiene altas cantidades de sodio, formando aductos de proteína isolevuglandina (IsoLG) en las células. Estos aductos sirven como neoantígenos y se presentan en la superficie de las CD. Las células tratadas con alto contenido de sal se inyectan en ratones a través de la transferencia celular adoptiva.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Aislamiento de bazos de ratones

1. Preparación 1640 RPMI (Roswell Park Memorial Institute): 10% de suero fetal bovino (FBS), 0,10 mM de ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazineetanosulfónico (HEPES), 1 mM de piruvato de sodio, 50 μM de β-mercaptoetanol y 1% de penicilina/estreptomicina.
2. Eutanasia de ratones machos C57bl/6 de 10 a 12 semanas de edad mediante inhalación de CO₂. Rocíe el pecho y los lados del ratón con etano....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
APC/Cy7 anti-ratón CD11c	Bioleyenda	117324
Búfer de ejecución de autoMACS	Miltenyi Biotec	130-091-221
CD11c MicroBeads Ultrapure	Miltenyi Biotec	130-108-338
Colagenasa D	Roche	11088866001
DNasa I	Roche	10104159001
dPBS sin calcio y magnesio	Corning	21-031-CV
Reactivo de bloqueo FcR	Miltenyi Biotec	130-092-575
FITC anti-ratón CD45	Bioleyenda	103108
Tubo GentleMACS C	Miltenyi Biotec	130-096-334
Dispositivo disociador GentleMACS	Miltenyi Biotec	130-093-235	Protocolo de uso: Spleen 04.01
Kit de tinción de células muertas violetas fijables LIVE/DEAD	Invitrogen	L34964
Columnas LS	Miltenyi Biotec	130-042-401
Separador de QuadroMACs	Miltenyi Biotec	130-090-976
RPMI 1640 medio	Gibco	11835-030