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Generación de uniones neuromusculares mediante un dispositivo microfluídico

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Stoklund Dittlau, K. et al., Generación de Unidades Motoras Humanas con Uniones Neuromusculares Funcionales en Dispositivos Microfluídicos.J. Vis. Exp. (2021)

El video muestra la formación de uniones neuromusculares utilizando un dispositivo microfluídico. Las células precursoras neurales y las células progenitoras musculares se siembran en diferentes pocillos dentro del dispositivo y se dejan madurar en neuronas motoras y miotubos, respectivamente. La creación de un gradiente químico y de volumen conduce al desarrollo de uniones neuromusculares activas.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

Todos los reactivos y equipos utilizados en este protocolo se enumeran en la Tabla de Materiales y deben usarse estériles. Los medios deben calentarse a temperatura ambiente (RT) antes de su uso, a menos que se especifique lo contrario. Para obtener una descripción general del protocolo de cocultivo, consulte la Figura 1.

1. Diferenciación de progenitores de neuronas motoras a partir de células madre pluripotentes inducidas (iPSCs)

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Resumen esquemático del protocolo de la unidad motora en dispositivos microfluídicos.Línea de tiempo de diferenciación y visión general del cocultivo desde el día 0 hasta el día 28 según la línea de tiempo del protocolo de diferenciación de neuronas motoras. La diferenciación de las neuronas motoras de las iPSC se inicia en el día 0 y se realiza como se indicó anteriormente durante los 10 d.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ácido acéticoCHEM-Lab NVCL00.0116.1000Componente de recubrimiento. H226, H314. Pág. 280
Agrina (proteína humana recombinante)Sistemas de investigación y desarrollo6624-AG-050Suplemento para los medios de comunicación
ácido ascórbicosigmaA4403Componente multimedia
βIII-tubulina (Tubulina)AbcamAB7751Anticuerpo (1:500)
β-mercaptoetanolThermo Fisher Scientific31350010Componente de medios. H317. Pág. 280.
B-27 sin vitamina AThermo Fisher Scientific12587-010Componente multimedia
BDNF (factor neurotrófico derivado del cerebro)Peprotech450-02BFactor de crecimiento
bFGF (factor de crecimiento de fibroblastos humanos básicos recombinantes)Peprotech100-18BFactor de crecimiento
Colágeno de piel de becerroThermo Fisher Scientific17104019Componente de recubrimiento
CNTF (factor neurotrófico ciliar)Peprotech450-13BFactor de crecimiento
DAPTTocris BiocienciaArtículo 2634Suplemento para los medios de comunicación
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific11330032Componente multimedia
DmsosigmaD2650-100MLComponente de criopreservación. H315, H319, H335. Pág. 280.
Solución salina tamponada con fosfato (DPBS) de DulbeccoThermo Fisher Scientific14190250Sin calcio, sin magnesio
etanolVWR20.821.296esterilización. H225. Pág. 280
Suero fetal bovinoThermo Fisher Scientific10270106Componente multimedia
Medio de montaje de fluorescenciaDakoS3023Componente inmunocitoquímico
GDNF (factor neurotrófico derivado de líneas celulares gliales)Peprotech450-10BFactor de crecimiento
Suero de caballoThermo Fisher Scientific16050122Componente multimedia
IMDMThermo Fisher Scientific12440053Componente multimedia
Insulina transferrina selenioThermo Fisher Scientific41400045Componente multimedia
Reemplazo de suero knockoutThermo Fisher Scientific10828-028Componente de criopreservación
Laminina de la membrana basal del sarcoma murino de Engelbreth-Holm-SwarmsigmaL2020-1MGComponente de recubrimiento y suplemento de medios
L-glutaminaThermo Fisher Scientific25030-024Componente multimedia
Suplemento N-2Thermo Fisher Scientific17502-048Componente multimedia
Medio neurobasalThermo Fisher Scientific21103049Componente de recubrimiento y medios
Aminoácidos no esencialesThermo Fisher Scientific11140050Componente multimedia
Parafilm MsigmaP7793-1EAAlmacenamiento de equipos
Penicilina/estreptomicina (5000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15070063Componente multimedia
Placa de Petri (3 cm)Nunc153066Diámetro: 3 cm
Placa de Petri (10 cm)Sarstedt833.902Diámetro: 10 cm
Placa (6 pocillos)Cellstar Greiner bio-one657160Placa de cultivo
Poli-L-ornitina (PLO)sigmaP3655-100MGComponente de recubrimiento
Ácido retinoicosigmaR2625Suplemento para medios de comunicación. H302, H315, H360FD, H410. Pág. 280.
Suplemento celular RevitaThermo Fisher ScientificA2644501Solución inhibidora de ROCK
Agonista suavizadoMerch Millipore566660Suplemento para los medios de comunicación
Piruvato de sodioTecnologías de la Vida11360-070Componente multimedia
Matraz T75sigmaCLS3276Placa de cultivo
TrypLE expressThermo Fisher Scientific12605010Solución de disociación MAB
Clorhidrato de tubocirarina pentahidratadosigmaT2379-100GBloqueador de los receptores de acetilcolina. H301. Pág. 280.
Dispositivo microfluídico premontado XonaChipsXona MicrofluídicaXC150Longitud de la microranura: 150 μm

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