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Preparación de cortes de cerebro en cuña para visualizar neuronas auditivas

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Fischl, M. J. et al., Preparación de cortes de cuña in vitro para imitar la conectividad de circuitos neuronales in vivo.J. Vis. Exp.(2020)

Este video muestra el proceso de preparación de cortes de cerebro en forma de cuña en un entorno de laboratorio. Usando un vibrátomo, se elabora una rebanada en forma de cuña del cerebro de un ratón con un grosor variable. Este corte contiene la raíz del nervio auditivo ubicada en el extremo más grueso, mientras que las neuronas relacionadas con la audición se encuentran en el extremo más delgado.

Protocol

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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Extracción del cerebro con raíz del nervio auditivo intacta para la estimulación

NOTA: Los ratones para estos experimentos se obtuvieron cruzando ratones transgénicos ChAT-IRES-Cre sobre un fondo C57BL/6J con ratones reporteros tdTomato (Ai14). Los ratones utilizados para la histología y la electrofisiología fueron de inicio posterior a la audición (P14-P23), que es alrededor de P12 en ratones. Las neuron....

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Results

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Figura 1: Esquema del corte de cuña e imagen de ejemplo. (A) Esquema del circuito de retroalimentación olivocochlear medial. Las flechas azules indican la vía ascendente aferente a las neuronas MOC, y las flechas negras indican la vía de retroalimentación descendente desde las neuronas MOC hasta la base de las células ciliadas externas (OHC). (B) Imagen de campo clar.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Preparaciones experimentales
Agar, en polvoFisher CientíficoBP1423500Bloque de agar al 4% utilizado para estabilizar el tejido cerebral durante el corte de vibratomo
AlexaFluor Hidrazida 488InvitrogenA10436Fluoróforo utilizado en solución interna para confirmar el éxito del parche de neuronas MOC
Balanza analíticaGeneses Scientific (Intramalls)AV114Pesaje de productos químicos
Hoja de afeitar de doble filoTed Pella121-6Cuchilla de corte Vibratome
Ácido quinurénico (5 g)Sigma AldrichK3375-5GAditivo de ACSF para cortar utilizado para reducir la actividad de las neuronas durante la disección y el corte con el fin de mejorar la salud de los tejidos para el pinzamiento del parche
Medidor de pHFisher Scientific (Intracentros comerciales)13-620-451Probador de pH de solución
Placas de Petri de plástico de 100 mm de diámetro X 20 mmFisher Scientific (Intracentros comerciales)12-556-002Preparación de agar al 4%
Placa calefactora de agitaciónFisher Scientific (Intracentros comerciales)11-500-150Calentamiento para la preparación de agar al 4%
Disección y corte
BiocitinaSigma AldrichB4261-250MGProducto químico utilizado para el trazado axonal (conjugado con Streptavidin 488)
Microscopio de disecciónÁmbito de aplicaciónSM-1BNPara una disección precisa durante la extracción del cerebro
Pinzas Dumont #5Herramientas de Bellas Ciencias11252-20Herramienta de disección con pinzas finas
Pinzas económicas #3WPI (en inglés501976Herramienta de disección con fórceps
Placa de Petri de vidrio de 150 mm de diámetro x 15 mm de altoFisher Scientific (Intracentros comerciales)08-747EPlato de disección
Papel de interfaz (203 x 254 mm, membrana PCTE, 10um)Thomas Científico1220823Incubación de cortes/aplicación de biocitina
Leica VT1200S VibratomeLeica1491200S001Vibratome para el seccionado de rodajas en cuña
Tijeras de mayonesaRobozRS-6872Herramienta de disección
Cuchillas de acero al carbono de un solo filoFisher Scientific (Intracentros comerciales)12-640Cuchilla de afeitar para disección
Disco de muestra, orientadorLeica14048142068Platina de vibratomo especializada para una inclinación reproducible
EspátulaFisherSciTeléfono 14-375-10Herramienta de disección
Súper pegamentoNeweggAño 15187Se utiliza para pegar tejido a la etapa de vibratomo
Tijeras de resorte VannasHerramientas de Bellas Ciencias91500-09Herramienta de disección
)

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