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Artículo de método

Aislamiento de células de los ganglios sensoriales

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Kaelberer, M. M., et al. Un método para apuntar y aislar las neuronas sensoriales que inervan las vías respiratorias en ratones. J. Vis. Exp. (2016).

Este video muestra el aislamiento de las células de los ganglios sensoriales de ratones. Los ganglios se someten a digestión enzimática para disolver la matriz extracelular. A continuación, las células individuales se recogen mediante filtrado a través de un filtro de células seguido de una centrifugación en gradiente de densidad para la eliminación de residuos. Finalmente, se realiza el lavado y la centrifugación para recoger las células aisladas para su posterior análisis.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Disociación sensorial de los ganglios

  1. Pipetear 500 μl de solución de disociación de ganglios (GaDS) (Tabla 1), dejando los ganglios en el tubo. Lave los ganglios una vez agregando 1 ml de solución tampón de fosfato (PBS), espere a que los ganglios se asienten en el fondo del tubo y luego pipetee el PBS.
  2. Añadir 1 ml de GaDS y 22 μl de enzima digestiva (mezcla de colagenasa I/II y proteasa, 2,5 mg/ml en agua) a cada tubo.
  3. Añada 20 μl de ....

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Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Solución salina tamponada con fosfato (PBS) de Dulbecco libre de Ca y MgGibco14190-144
DMEM/F12 avanzadoGibco12634-010
glutamina (Glutamax)Gibco35050-061
HEPESGibco15630-080
N2Gibco17502-048
B27 (sin vitamina A)Gibco12587-010
Factor de crecimiento nervioso (NGF)sigmaN6009stock 50 μg/ml en PBS/10% FBS
enzima de digestión, Liberase DH Grado de investigaciónRoche5401054001Stock 2,5 mg/ml en agua
solución de partículas (Percoll)sigmaP1644-25ML
Bloque calefactorLabNet (en inglés)
Filtro de celdas de 70 mmmhalcón352350

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