Aislamiento y cultivo de progenitores granulares de neuronas cerebelosas murinas

Resumen

Fuente: Bovio, P., et al., Aislamiento y cultivo de progenitores neurales seguidos de inmunoprecipitación de cromatina-inmunoprecipitación de la marca de dimetilación de la lisina 3 lisina 79. J. Vis. Exp. (2018)

Este video muestra el aislamiento y cultivo de células progenitoras neurales cerebelosas del cerebelo de un cachorro de ratón. Los progenitores de las neuronas granulosas cerebelosas se aíslan y purifican a través de la adhesión diferencial, eliminando eficazmente los astrocitos. Estos progenitores cultivados se diferencian posteriormente en neuronas granulosas cerebelosas.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Preparativos

1. Preparativos para el aislamiento de CGNP (progenitor de neuronas granulares cerebelosas)
   1. Organizar un apareamiento adecuado de ratones para generar animales P5-P7 para aislar el cerebelo (3-5 animales por ChIP y condición).
   2. Prepare HBSS/glucosa añadiendo 6 mg/mL de glucosa al tampón HBSS.
   3. Prepare el medio de cultivo celular (MCG) de CGNP añadiendo un suplemento de N2 al 1 % (v/v), un 1 % (v/v....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Suplemento B27 (50x)	Tecnologías de la Vida	17504044	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCP
DMEM-F12	Tecnologías de la Vida	11320-033	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCG
Suero Fetal Bovino 10% (v/v)	Gibco	10082147	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el aislamiento de CPC y CGM
glucosa	Sigma-Aldrich	G5767	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el aislamiento de CGNP
Glutatión (1,25 mg/ml)	Sigma-Aldrich	G4251	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCP
glicina	Carl Roth	3187	Categoría: ChIP Abreviatura/Comentario: Para la fijación celular
La solución salina equilibrada de Hank	Tecnologías de la Vida	14025-100	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: HBSS
L-glutamina (200 mM)	Tecnologías de la Vida	25030081	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCP
Laminina	Sigma-Aldrich	L2020	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el cultivo del PCCh
Suplemento de N2	Tecnologías de la Vida	17502048	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCG
Medio neurobasal	Gibco	21103049	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCP
Penicilina-Estreptomicina-Neomicina 1% (v/v)	Tecnologías de la Vida	15640055	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: PSN, para CCM y CGM
Solución salina tamponada con fosfato	Tecnologías de la Vida	10010023	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: PBS, para el aislamiento de CPC
Poli-D-lisina	Sigma-Aldrich	P6407	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el aislamiento de CGNP
Hidrobromuro de poli-L-ornitina	Sigma Aldrich	P3655	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el cultivo del PCCh
Cloruro de potasio	Termo Fisher	AM9640G	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: KCl, por CGM
Erizo sónico (SHH)	Sigma-Aldrich	SRP6004	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el aislamiento de CGNP
Superóxido dismutasa (1 mg/ml)	Sigma-Aldrich	S7571	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para MCP
Tripsina-EDTA 0,05% (p/v)	Sigma Aldrich	59417C	Categoría: Cultivo celular Abreviatura/Comentario: Para el aislamiento CPC