Un método para generar medio condicionado por oligodendrocitos

Abstract

Fuente: Mazuir, E., et al. Generación de oligodendrocitos y medio condicionado con oligodendrocitos para experimentos de co-cultivo. J. Vis. Exp. (2020)

Este video demuestra la producción de medio condicionado por oligodendrocitos (OCM) a partir de células del linaje de oligodendrocitos estresándolas para mejorar su liberación molecular en el medio. Este medio, que es rico en factores de crecimiento, citocinas y otras moléculas bioactivas, se puede agregar a los cultivos de neuronas para obtener información sobre el impacto de los factores secretados por oligodendrocitos en la fisiología y la conectividad neuronal.

Protocol

>1. Recolección y cultivo de células del linaje OL (OL)

NOTA: Estos pasos deben realizarse en una campana de flujo laminar en condiciones estériles.

1. Al día siguiente de agitar, prepare el medio Bottenstein-Sato (BS) de acuerdo con la Tabla 1.
2. Enjuague las placas de Petri recubiertas 3 veces con agua destilada estéril.
3. Recolectar el sobrenadante de los matraces que contiene principalmente células del linaje OL, pero también algunas células microgliales, y colocarlo en placas de Petri de 100 mm sin recubrimiento.
   nota: Es....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Suplemento de B27	ThermoFisher	17504044
Solución de D-(+)-glucosa	sigma	G8769
Dulbecco's Modified Eagle Medio	ThermoFisher	31966021
Etanol 100%	sigma	32221-M
Etanol 70%	Productos químicos de VWR	83801.36
Suero de becerro fetal	ThermoFisher	10082147
Neurobasal	ThermoFisher	21103049
Penicilina-Estreptomicina	ThermoFisher	15140122
Solución salina tamponada con fosfato sin calcio ni magnesio	ThermoFisher	A1285601
Polietileno (PEI)	sigma	P3143
Medios de comunicación de Bottenstein-Sato (BS)
apo-Transferrina humana	sigma	T1147
BSA (Albúmina sérica bovina)	sigma	A4161
Dulbecco's Modified Eagle Medio	ThermoFisher	31966021
insulina	sigma	I5500
PDGF	Peprotech	AF-100-13A
Penicilina-Estreptomicina	ThermoFisher	15140122
progesterona	sigma	P8783
Dihidrocloruro de putrescina	sigma	P5780
Selenito de sodio	sigma	S5261
T3 (sal sódica de 3,3',5-Triyodo-L-tironina)	sigma	T6397
T4 (L-tiroxina)	sigma	T1775
herramientas
Filtro de 0,22 μm	sartorio	514-7010
Jeringa de 1 ml	Terumo	1611127
Placa de Petri de 100 mm	Dutscher	193100
Tubo de 15 mL	Ciencias de la vida de Corning	734-1867
Tubo de 50 mL	Ciencias de la vida de Corning	734-1869
Placa de Petri de 60 mm	Dutscher	67003