Aislamiento de neuronas sensoriales y cocultivo con células asesinas naturales

Resumen

Fuente:Ahmadi, A., et al. Desentrañando la interacción entre las células asesinas naturales y las neuronas nociceptoras. J. Vis. Exp. (2022).

Este video describe el aislamiento de las neuronas DRG a través de la digestión enzimática, la disociación mecánica y la centrifugación en gradiente. Las células DRG se cultivan conjuntamente con células asesinas naturales en una matriz extracelular para estudiar la interacción entre las células inmunitarias y las neuronas sensoriales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Aislamiento, cultivo y estimulación de células NK

1. Generar neurona nociceptora intacta (control de compañeros de camada; Ratones TRPV1wt::D TAfl/wt) y ablacionados (TRPV1cre::D TAfl/wt) cruzando ratones con toxina lox-stop-lox-diftheria (DTAfl/fl) con ratones TRPV1cre/wt.
2. Usando la inhalación de CO2, eutanasia a un ratón de control de compañero de camada ingenuo (TRPV1wt::D TAfl/wt).
3. Recoja el bazo en un tubo de micr....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
B-27	Laboratorio Jackson	Nº de gato: 009669
Grado de cultivo de albúmina sérica bovina (BSA)	Instrumentos de precisión mundial	Nº de gato: 504167
BV421 anti-ratón NK-1.1	Fisher Científico	Nº de gato: 12430112
Filtro de células (50 μm)	Fisher Científico	Nº de gato: A3160702
Colagenasa IV	Fisher Científico	Nº de gato: 15140148
Dispasa II	Fisher Científico	Nº de cat: 13-678-20B
Medio de águila modificada de Dulbecco (DMEM)	Fisher Científico	Nº de cat: 07-200-95
Kit de aislamiento de células EasySep Mouse NK	sigma	Nº de gato: CLS2595
Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)	sigma	Nº de cat: C0130
Suero fetal bovino (FBS)	sigma	Nº de gato: 806552
Pipeta Pasteur de vidrio	sigma	Nº de cat: 470236-274
Factor neurotrófico derivado de líneas celulares gliales (GDNF)	VWR	Nº de cat: 02-0131
Laminina	Cedarlán	Nº de cat: 03-50/31
L-Glutamina	Gibco	Nº de cat: A14867-01
IL-15 recombinante de ratón	Gibco	Nº de cat: 22400-089
IL-2 recombinante de ratón	Gibco	Nº de cat: 21103-049
Factor de crecimiento nervioso (NGF)	Tecnologías de la Vida	Nº de cat: 13257-019
Medios neurobasales	PeproTech	Nº de cat: 450-51-10
Penicilina y estreptomicina	PeproTech	Nº de cat: 210-15
Majas	Tecnología de células madre	Nº de gato: 19855
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Bioleyenda	Nº de gato: 108732	Clonar PK136
Medios RPMI 1640	Bioleyenda	Nº de gato: 137606	Clon 29A1.4
Pinzas y herramientas de disección.	Bioleyenda	Nº de cat: 65-0865-14
Placa de 96 pocillos con fondo en forma de U	Bioleyenda	Nº de gato: 101319
Tinte de viabilidad eFlour-780	Becton Dickinson
Incubadora de CO2
Microscopio de disección