Disección y montaje de explantes de cerebro de larvas de mosca de la fruta

Resumen

Fuente: Sheng, C., et al. Imágenes en vivo de lapso de tiempo y cuantificación de la dinámica rápida de ramas dendríticas en neuronas de Drosophila en desarrollo. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra la disección y montaje de explantes cerebrales de larvas de Drosophila. El sistema nervioso central (SNC), unido a los discos oculares, se extrae de las larvas y luego se monta en un portaobjetos de vidrio en una solución salina fisiológica.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Disección y montaje de explantes de cerebro de larvas

1. Diseccionar los cerebros de las larvas en la solución salina externa fisiológica (120 mM de NaCl, 4 mM de MgCl₂, 3 mM de KCl, 10 mM de NaHCO₃, 10 mM de glucosa, 10 mM de sacarosa, 5 mM de ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanosulfónico (TES), 10 mM de ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazineetanosulfónico (HEPES), 2 mM de Ca²⁺, pH 7,2) bajo un mi....

Resultados

Figura 1: Flujo de trabajo del protocolo de imagen y cuantificación de dinámica de dendritas. (A) El protocolo contiene seis pasos que abarcan la preparación de muestras, la recolección de imágenes, el procesamiento de imágenes y la cuantificación semiautomática de la dinámica de las dendritas. (B) Un diagrama esquemático que ilustra una cámara de imágenes que con.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Grasa de alto vacío	Dow Corning	79751-30
Cubierta de vidrio para microscopio	Fisher Científico	12-544-E
Portaobjetos de microscopio Superfrost Plus	Fisher Científico	Teléfono 12-550-15
Reactivos
glucosa
HEPES
Kcl
MgCl2
NaCl
NaHCO3
Pbs
sacarosa
TES