Instalación de ventanas ópticas en el cerebro de ratones transgénicos para visualizar actividades neuronales

Resumen

Fuente: Lin, X., et al. Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Rate. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra el registro de la actividad neuronal del cerebro a través de una ventana óptica en ratones transgénicos. Los ratones expresan una proteína fluorescente que permite la detección de actividades neuronales. Se extrae cuidadosamente una pequeña porción del cráneo para instalar una ventana óptica, y luego se cubre el cráneo con cemento negro para bloquear la luz antes de la obtención de imágenes.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Preparando al animal para la obtención de imágenes

1. Coloque gasas estériles, hisopos de algodón e instrumentos quirúrgicos esterilizados en autoclave en el área de cirugía. Encienda un esterilizador de micro perlas para la esterilización interquirúrgica de herramientas quirúrgicas.
2. Anestesiar al ratón (macho o hembra, 1,5-2,5 meses, 20-25 g) mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de una mezcla de ketamina (17,2 mg/mL), xila....

Resultados

Figura 1. Creación de ventanas bilaterales en el cráneo. (A) Una imagen fotográfica muestra 2 ventanas ópticas craneales a cada lado del cráneo que se superponen al área S1. (B) Gran aumento de la región en caja de la imagen (A) que muestra ventanas ópticas bilaterales que exponen la duramadre subyacente y los vasos sanguíneos. Barra de escala = 680 μm. (C) El cráneo expuesto. (D) Creación de un surc.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
C57BL/6J-Tg(Thy1-GCaMP6s)GP4.3Dkim/J	Jackson	24275	Puede ser cualquier cepa producida por el indicador y efector neuronal codificado genéticamente que expresa el indicador de calcio fluorescente verde, GCaMP, en subconjuntos de neuronas excitadoras en la corteza.
B6. Cg-Tg(Thy1-EGFP)OJrs/GfngJ.	Jackson	7919	Puede ser cualquier cepa que exprese EGFP en subconjuntos de neuronas dentro de poblaciones específicas en la corteza, proporcionando una tinción brillante y vital similar a la de Golgi.
Pinza Dumont n.º 5, estándar, Dumoxel	Herramientas de Bellas Ciencias	11251-30	Puede ser cualquier marca de elección.
Pinzas Dumont n.º 5SF	Herramientas de Bellas Ciencias	11252-00	Puede ser cualquier marca de elección.
Micro Esterilizador de Perlas	Equipo de laboratorio del sur	B1201	Puede ser cualquier marca de elección.
Adaptador de sujeción de cabeza SG-4N de Harishige	Investigación Tritech	SG-4N	Puede ser cualquier marca de elección.
Kit completo de microtaladro ideal	Aparato de Harvard	72-6065	Puede ser cualquier marca de elección.
Rebabas para Micro Drill	Herramientas de Bellas Ciencias	19007-05	Puede ser cualquier marca de elección.
Cubreobjetos redondo, 3 mm	Biociencias de Harvard	W4 64-0720	Puede ser cualquier marca de elección.
Cubreobjetos redondo, 5 mm	Biociencias de Harvard	W4 64-0700	Puede ser cualquier marca de elección.
Adhesivo óptico Norland	Productos Norland	7106	Puede ser cualquier marca de elección.
Superpegamento líquido Loctite	WB Mason	LOC1647358	Puede ser cualquier marca de elección.
Kit de cemento de agarre, polvo y solvente	Dentsply	675570	Puede ser cualquier marca de elección. Mezcle 5 partes de cemento dental blanco en polvo (Grip Cement) con una parte de pintura en polvo negra Tempera (para protegerse de la luz; algunos usuarios prefieren una proporción de 10:1).
Espuma de gel	Moore Médico	Año 2928	Puede ser cualquier marca de elección.
Micro tijeras de disección	Roboz	RS-5841	Puede ser cualquier marca de elección.
Líquido cefalorraquídeo artificial (PPA)	-	-	El ACSF contiene 125 mM de NaCl, 4,5 mM de KCl, 26 mM de NaHCO3, 1,25 mM de NaH2PO4, 2 mM de CaCl2, 1 mM de MgCl2 y 20 mM de glucosa. Burbujee el ACSF con oxígeno (95% de oxígeno, 5% de dióxido de carbono) y ajuste el pH a 7,4. Prepare una solución fresca de ACSF antes de cada experimento.