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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Implantación de electrodos VEP
- Anestesiar al animal con una inyección intraperitoneal de ketamina (75 mg/kg) y medetomidina (0,5 mg/kg)
nota: Después de la inducción de la anestesia, observe los reflejos de retirada (prueba de pinzamiento, reflejo corneal y palpebral, etc.) y su ausencia como indicación para iniciar la cirugía. Monitoree continuamente a los animales durante toda la cirugía y administre medicamentos anestésicos adicionales (10% de la dosis inicial de ketamina por recarga) si los reflejos están presentes. En los experimentos se utilizan ratas adultas (>12 semanas).
- Afeitar la piel de la zona quirúrgica. Coloque al animal en una almohadilla térmica (37 °C) para mantener la temperatura corporal durante la cirugía. Prepare la piel mediante la aplicación tópica de povidona yodada. Aplique un paño quirúrgico. Aplique ungüento oftálmico tópico para prevenir la sequedad de la córnea bajo anestesia general. Mantener la asepsia mediante el uso de instrumentos estériles.
- Haz una incisión cutánea longitudinal en la línea media de la piel de la cabeza. Despeje el tejido conectivo para lograr una buena exposición del cráneo.
- Taladre con cuidado pequeños agujeros de rebaba manualmente con un micro taladro manual a 7 mm detrás del bregma y 3 mm lateralmente a la línea media.
- Implante electrodos de tornillo a través del cráneo hasta la corteza (área 17), penetrando en la corteza hasta una profundidad de aproximadamente 0,5 mm. Implante un electrodo de tornillo de referencia en la línea media 3 mm rostral a la bregma. Aplique cemento dental para revestir y fijar los tornillos (no siempre es necesario).
- Suturar la piel de la cabeza, administrar ungüento antibiótico sobre la piel y permitir que el animal se recupere de la anestesia en una almohadilla térmica><.
Nota: Alternativamente, los electrodos se pueden dejar expuestos para que no sea necesario volver a abrir la piel en cada grabación. Inmediatamente después del cese de la cirugía, pero antes de la recuperación anestésica, administrar un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE) (si no se administró antes de la operación) o un analgésico opioide. Monitorear a los animales constantemente hasta que se recuperen completamente de la anestesia y estén ambulatorios.
- Espere al menos 1 semana para que los animales se recuperen de la cirugía antes del registro de VEP.
>2. Grabación VEP
- Anestesiar al animal y preparar la piel como 1.1 y 1.2.
Nota: Se puede utilizar una dosis más baja de anestésicos para el registro electrofisiológico (ketamina 40 mg/kg y medetomidina 0,25 mg/kg).
- Coloque la rata en una habitación oscura y deje que se adapte a la oscuridad durante 5 a 30 minutos. En algunos casos, las ratas pueden estar adaptadas a la oscuridad O/N para las grabaciones escotópicas o adaptadas a la luz para las grabaciones fotópicas de VEP.
- Mantener la temperatura corporal a 37 ± 0,5 °C mediante el sistema de manta homeotérmica con sonda de termómetro rectal.
- Dilatar las pupilas con colirio de tropicamida al 1,0%. Abra la piel sobre el cráneo para acceder a los electrodos de tornillo in situ precolocados.
- Conecte el tornillo sobre la corteza visual contralateral del ojo estimulado y el tornillo de referencia al amplificador. Inserte un electrodo de aguja en la cola como el suelo. Mida y mantenga la impedancia del electrodo por debajo de 5 kΩ.
- Coloque un mini estimulador de Ganzfeld directamente sobre la piel alrededor de los párpados para proporcionar un aislamiento ocular superior. La iluminación del estimulador debe ser calibrada previamente por un fotómetro.
- Proporciona estimulación fótica a través de destellos de luz 100 veces a una frecuencia de 1 Hz, con ajustes de filtro de paso de banda baja y alta de 1 y 100 Hz, respectivamente. La frecuencia de muestreo de la señal es de 5 kHz.
Nota: Las señales deben muestrearse al menos a unos 250 - 300 Hz para garantizar que se recojan más de dos muestras durante cada ciclo.
- Suturar la piel y mantener a los animales en una almohadilla térmica para recuperarse de la anestesia. El registro se puede registrar repetidamente en animales individuales para monitorear los cambios funcionales durante un período de tiempo.