Registro extracelular de la actividad eléctrica en el sistema nervioso central de Drosophila

Resumen

Fuente: Swale, D. R., et al. Registro electrofisiológico de la actividad del sistema nervioso central de Drosophila melanogaster de tercer estadio. J. Vis. Exp. (2018)

El video muestra el registro extracelular de la actividad neuronal del sistema nervioso central (SNC) de las larvas de Drosophila. El SNC seccionado se coloca en una cámara de registro y se registra la actividad eléctrica de un nervio descendente para establecer la frecuencia de disparo de referencia. A continuación, se introduce un agente de prueba y se registra el cambio en la frecuencia de disparo para determinar el efecto excitador o inhibidor del agente.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Diseccionar y preparar la larva de Drosophila CNS

NOTA: Los métodos para la disección del SNC de las larvas están claramente ilustrados en Hafer y Schedl, pero estos métodos publicados anteriormente reducen la longitud de las neuronas descendentes que son importantes para medir la frecuencia de los picos. Aquí, se describe un método adicional para extirpar el SNC larvario que mantiene largas e intactas las neuronas descendentes.

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Resultados

Figura 1: Método para extirpar el SNC de los gusanos del tercer estadio. (A)Gusano intacto sumergido en 200 μL de solución salina. La flecha indica los ganchos bucales que se utilizan para la separación de la pared del cuerpo. (B) Se colocan dos pares de pinzas en el centro del gusano y en los ganchos bucales para comenzar la separación de la pared del cuerpo. (C) La

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Drosophila melanogaster (cepa OR)	Centro de Acciones de Drosophila de Bloomington	Artículo 2376
Mesa de aislamiento de vibraciones	Sistemas cinéticos	Serie 9200
Jaula de Faraday	Sistemas cinéticos	N/A
Microscopio de disección en una pluma	Nikon	SMZ800N	Se pueden utilizar varios visores; el soporte de la pluma es fundamental
Amplificador diferencial AC/DC	ADInstrumentos	AM3000H	Se puede utilizar el modelo 1700 en lugar del modelo 3000
Monitor de audio	ADInstrumentos	AM3300
Eliminador de ruido Hum Bug	Sistemas A-M	726300
Sistema de adquisición de datos (PowerLab)	ADInstrumentos	PL3504	Se pueden utilizar varios modelos de PowerLab.
Software Lab Chart Pro	ADInstrumentos	N/A - Descarga en línea
Luces de fibra óptica	Óptica Edmund	89-740	Se pueden utilizar diferentes fuentes de luz, pero la fibra óptica es la más adaptable
Micromanipulador	Instrumentos de precisión mundial	M325
Soporte de microelectrodos	Instrumentos de precisión mundial	MEH715	Diferentes modelos son aceptables
Cables BNC	Instrumentos de precisión mundial	Múltiple según el tamaño
Capilares de vidrio	Instrumentos de precisión mundial	PG52151-4
Extractor de microelectrodos	Instrumentos Sutter	P-1000	También puede usar Narashige PC-100
Cera negra	Suministro Biológico de Carolina	974228
Alfileres para insectos sin recubrimiento, tamaño #2	Bioquip	1208S2
Pinzas Fince	Herramientas de Bellas Ciencias	11254-20
Tijeras de resorte Vannas	Herramientas de Bellas Ciencias	15000-03