Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
PV-Cre se utilizaron ratones machos knock-in de 10-25 semanas de edad. Los ratones se alojaron en condiciones estándar en la instalación de animales y se mantuvieron en un ciclo de 12 luces / oscuridad.
1. Preparación de matrices de alambre de tungsteno para grabaciones LFP
- Pegue una fibra óptica a la matriz de cables de modo que la punta de la fibra esté al nivel del cable más corto y la punta de la fibra esté muy cerca, pero sin tocar los cables de tungsteno. Mantenga el ángulo de la fibra lo más pequeño posible para evitar daños en los tejidos durante la implantación.
>2. Estimulación optogenética y adquisición de datos electrofisiológicos
- Compruebe la salida de luz del cable de conexión. Estime la salida de luz de la punta de fibra después de la conexión en función de la velocidad de transmisión de la fibra implantada. Asegúrese de que la salida de luz de la punta de fibra esté entre 5 y 15 mW para permitir un arrastre confiable.
- Conecte el preamplificador de la etapa principal al conector implantado crónicamente. Conecte el cable de conexión de fibra óptica a la fibra del hipocampo implantada crónicamente para experimentos de estimulación optogenética. En los experimentos de estimulación de luz de control, la fibra óptica se conecta a una férula ficticia conectada al auricular.
- Coloque el ratón en la cámara de grabación.
- Abra el software para controlar el generador de estímulos para generar el protocolo de estimulación.
- Seleccione el canal que controla el láser DPSS de 473 nm.
- Abra el software del sistema de grabación. Haga clic en "ACQ" para adquirir y en "REC" para grabar. Espere antes de iniciar la estimulación lumínica para registrar el comportamiento de referencia (por ejemplo, 2 minutos para recuperar la velocidad de referencia o 30 minutos para extraer los campos de posición de referencia).
- Abra el software para controlar el generador de estímulos. Haga clic en "Abrir archivo >" y seleccione el archivo de protocolo de su elección. Haga clic en "Descargar e iniciar" para iniciar la estimulación de luz.
