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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
>1. Registro de la Respuesta Auditiva del Tronco Encefálico (ABR)
- Anestesiar ratas Sprague Dawley (SD) (cachorros de 1 a 14 días de edad y adultos de 2 meses, ambos sexos) con una sola inyección de pentobarbital sódico al 1,5% (22 mg/kg para cachorros y 30 mg/kg para adultos, intraperitoneal (i.p.).
- Colocar el animal anestesiado en un molde de espuma de polietileno para inmovilizar el cuerpo del animal. Coloque al animal en una mesa antivibratoria en una habitación que atenúe el sonido. Mantenga la temperatura corporal del animal a 37,5 °C con una almohadilla térmica.
- Limpie el área de la cabeza con etanol al 70% (vol/vol). Mediante el uso de una tijera fina, realice una incisión ventrolateral de 1-2 mm al pabellón auricular externo para colocar el electrodo de referencia o tierra. Un electrodo de aguja subdérmico (electrodo de registro) se encuentra sobre el vértice del cráneo (Figura 1A).
- Con el generador de funciones, genere ráfagas de tonos calibradas (1 ms de subida/bajada, meseta de 3 ms) de varias frecuencias (2, 4, 8, 16, 24 y 32 kHz) e intensidades (disminuidas de 85 a 10 dB SPL en pasos de 5 dB). Varíe la frecuencia y la amplitud manualmente o usando una computadora. Emitir estímulos sonoros a través de un altavoz electrostático situado a 10 cm de distancia hacia la cabeza del animal.
- Filtre (100-1.000 Hz), amplifique y promedie (256 veces) el potencial provocado por el sonido utilizando un procesador multifunción para obtener los ABR. Los seguimientos de ABR se supervisan en línea y se almacenan para su análisis fuera de línea. Se tarda unos 40 minutos en completar la grabación ABR de un animal.
nota: Por lo general, se pueden identificar de tres a siete picos (onda I a onda VII) con latencias inferiores a 15 ms (Figura 1B). El umbral ABR se define como el nivel sonoro mínimo en el que pueden detectarse las ondas I y II.
- Eutanasia antes de que los animales despierten de la anestesia (con una inyección intraperitoneal de 0,3 mL de pentobarbital sódico al 1,5%).
