Monitoreo de la corteza cerebral con una guía de electrodos múltiples en respuesta a agentes inductores de convulsiones

Abstract

Fuente: Lu, H. C., et al. Estimulación de corriente continua y registro de matriz de electrodos múltiples de la actividad similar a las convulsiones en la preparación de cortes de cerebro de ratones. J. Vis. Exp. (2016).

En este video, se investigan los efectos de la estimulación transcraneal de corriente directa (tDCS) en cortes de cerebro que contienen las regiones de la corteza cingulada anterior (ACC) y el tálamo, utilizando una matriz de electrodos múltiples (MEA) para medir las señales eléctricas. Mediante la administración de pulsos eléctricos y la infusión de fármacos inductores de convulsiones, el estudio investiga la respuesta del ACC a las convulsiones.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

>1. Preparación de la solución experimental y el equipo para el registro de MEA (matriz de electrodos múltiples)

1. Prepare líquido cefalorraquídeo artificial (aCSF; 124 mM de NaCl, 4,4 mM de KCl, 1 mM de NaH₂PO₃, 2 mM de MgSO₄, 2 mM de CaCl₂, 25 mM de NaHCO₃ y 10 mM de glucosa, burbujeados con 95% de_O2 y 5% de CO₂).
2. Utilice dos tipos de sondas MEA: MEA plana de 6 x 10 y MEA de 8 x 8. La pri....

Results

Figura 1: Preparación del corte de talamocingulato y configuración del sistema de registro MEA. (A) Procedimiento de corte MT-ACC (a) Extraer el cerebro y (b) transferir a aCSF oxigenado frío. (c) Hacer dos cortes parasagitales desde la línea media. (d) Vista lateral de la parte medial del bloqueo cerebral. (e) Hacer dos cortes ventrales en ángulo del bloqueo cerebral. (f) Pegue el bloque cerebral en.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurano	Corporación de Productos de Halocarbono	NDC 12164-002-25	4%
aCSF (total:1 L):
D(+)-Glucosa	Merck	1.08337.1000	10 mM
Hidrogenocarbonato de sodio	Merck	1.06329.0500	25 mM
cloruro de sodio	Merck	1.06404.1000	124 mM
(+)-L-ascorbato de sodio, >=98%	sigma	A4034-100G	0,15 g/2 c.c
Sulfato de magnesio, anhidro, ReagentPlus	sigma	M7506-500G	2 mM
Cloruro de calcio dihidratado	Merck	1.02382.1000	2 mM
Dihidrógeno fosfato de sodio monohidratado	Merck	1.06346.1000	1 mM
Cloruro de potasio	May & Baker LTD Dagenham, Inglaterra	EM 7616	4,4 mM
(+)-Bicucullina	TOCRIS	130	5 μM en aCSF
4-Aminopiridina	TOCRIS	940	250 μM en aCSF
Vibratomo	Vibratomo	Serie 1000	Bloque de corte en rodajas de 500 μm de grosor
Sondas de matriz de electrodos múltiples (MEA): 6 x 10 MEA planas	Sistemas multicanal	60MEA500/30iR-Ti-pr MEAS 6x10	diámetro del electrodo, 30 μm; distancia entre electrodos, 500 μm; impedancia, 50 kΩ a 200 Hz
Sondas de matriz multielectrodo (MEA): 8 x 8 MEA	Ayanda Biosystems	60MEA200/10iR-Ti-pr MEAS 8x8	electrodo piramidal; diámetro, 40 μm; altura de la punta, 50 μm; distancia entre electrodos, 200 μm; impedancia, 1.000 kΩ a 200 Hz
Se utilizó un amplificador de 60 canales con un filtro de paso de banda ajustado entre 0,1 Hz y 3 KHz con una amplificación de 1.200X	Sistemas multicanal	MEA-1060-BC
Software MC Rack a una frecuencia de muestreo de 10 KHz	Sistemas multicanal		Software para la recopilación de datos y registros
Control de un generador de impulsos	Sistemas multicanal	STG 1002
Kits de anclaje y sujeciones de corte	Instrumentos Warner	SHD-26H/10; WI64-0250
bomba peristáltica-minipuls3	Gilsom	MINIPULS3	Tasa de perfusión : 8 ml/min
Estimulador aislado	Sistemas A-M	Modelo 2100	intensidad de ±350 μA , duración de 200 μseg
Electrodo de tungsteno	Sistemas A-M	575300	colocado en el tálamo