Estimulación de la raíz nerviosa auditiva y registros de corriente postsináptica en un corte de cuña de cerebro de ratón

Abstract

Fuente: Fischl, M. J., et al. Preparación de cortes de cuña in vitro para imitar la conectividad de circuitos neuronales in vivo. J. Vis. Exp.(2020)

Este video muestra un protocolo para estimular la raíz del nervio auditivo y registrar las corrientes postsinápticas en las neuronas olivocochleares mediales en cortes de cuña de cerebro de ratón.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

1. Configuración y registro de electrofisiología

1. Coloque la rebanada de cuña en la cámara de grabación y asegúrela con un arpa o un sistema estabilizador. Perfundir el tejido de forma continua a una velocidad de 7-10 mL/min con ACSF tibio (35 °C) burbujeado con carbógeno.
2. Identifique las neuronas MOC olivocochleares mediales marcadas genéticamente en el núcleo ventral del cuerpo trapezoidal VNTB utilizando epifluorescencia con filtros de emisión de 561 nm para re....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Microscopio confocal vertical A1R	Instrumentos Nikon		Electrofisiología y microscopio de imagen, puede ser cualquier microscopio compatible con la electrofisiología
Electrodo de vidrio de borosilicato con filamento de 1,5 mm de diámetro exterior, diámetro interior de 1,1 mm, 10 cm de largo	Instrumento Sutter	BF150-110-10	Parche de sujeción de vidrio de pipeta
Relleno de electrodos MicroFil	WPI (en inglés	CMF20G	Relleno de pipeta de electrodo de parche
Calentador de solución en línea	Warner Instruments (GSAdvantage)	SH-27B	Calentador del sistema de perfusión Slice
Sistemas Multi-Micro-Manipuladores	Instrumentos Sutter	MPC-200 con MP285	Micromanipuladores para la fijación de parches y la colocación de electrodos de estimulación
P-1000 Extractor de pipetas horizontal para micropipetas de vidrio	Instrumentos Sutter	FG-P1000	Extractor de pipetas con abrazadera de parche
Amplificador de patch-clamp y software	HEKA	EPC-10 / Patchmaster Siguiente	Puede ser cualquier amplificador/software
Cámara de grabación	Instrumentos Warner	RC26G	Cortar el "baño" durante la grabación
Arpa de cámara de grabación	Instrumentos Warner	640253	Estabiliza el corte durante el registro electrofisiológico
Cámara de incubación Slice	Construcción personalizada		Cámara de retención calentada y oxigenada para las lonchas durante la recuperación después del corte
Unidad de aislamiento de estímulos	A.M.P.I.	Iso-Flex	Unidad de aislamiento de estímulos para electrofisiología
Jeringa 60CC	Fischer Scientific (Intramalls)	Teléfono 14-820-11	Electrofisiología, perfusión, manejo de fluidos
Controlador de temperatura	Warner Instruments (GSAdvantage)	TC-324C	Controlador de temperatura del sistema de perfusión de rebanadas
Tubo 1/8 OD 1/16 ID	Fischer Scientific (Intramalls)	14-171-129	Electrofisiología, perfusión, manejo de fluidos
Microelectrodo bipolar concéntrico Tugsten	WPI (en inglés	TM33CCINS	Electrodo estimulante para electrofisiología