Registro de las conexiones neuronales en cortes cerebrales agudos

Resumen

Fuente: Qi, G., et al. Caracterización electrofisiológica y morfológica de microcircuitos neuronales en cortes agudos de cerebro utilizando registros pareados de patch-clamp. J. Vis. Exp. (2015)

Este video muestra el procedimiento para mapear las conexiones sinápticas asegurando un corte de cerebro, colocando pipetas para lograr configuraciones de células completas y estimulando las neuronas presinápticas para registrar respuestas postsinápticas, dilucidando así la conectividad neuronal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran muestras de animales han sido revisados y aprobados por el comité de revisión ética animal apropiado.

>1. Registro emparejado de patch-clamp y llenado de biocytin

Dependiendo del tipo de conexión sináptica, se utilizan tres enfoques diferentes para encontrar neuronas acopladas sinápticamente. Si la probabilidad de conexión es baja (como se puede esperar para la mayoría de las conexiones excitatorias), proceda de la siguiente manera:

1. Conexiones neuronales con baja conectividad
   1. Llene las pipetas de parc....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
amplificador	HEKA	EPC 10 USB Triple	con 2-3 preamplificadores
microscopio	Olimpo	BX51WI	con 2 puertos de cámara y un objetivo de 4×, un objetivo de inmersión en agua de 40×
cámara	Fotónica TILL	VX55	Cámara CCD infrarroja
estación de trabajo	Luigs & Neumann	Infraparche 240	con una platina X-Y motorizada y un eje de enfoque motorizado para el microscopio
Micromanipulador	Luigs & Neumann	SM-5	Manipuladores X-Y-Z para 2-3 preamplificadores
Jaula de Faraday	Luigs & Neumann
Mesa antivibratoria	Espectros de Newport-Física
Maestro de parches	HEKA
microtomo	Microm Internacional	HM650V
Extractor de micropipetas	HEKA	Sutter P-97
Sistema neurolúcido	Microcampo brillante		con los softwares Neurolucida y Neuroexplorer