Evaluación de sinapsis en cinta en regiones de frecuencia específicas de la cóclea de ratón

Resumen

Fuente: Yu, S., et al. Evaluación morfológica y funcional de sinapsis en cinta en regiones de frecuencia específicas de la cóclea del ratón. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra un método para evaluar las sinapsis de cinta en regiones específicas de la cóclea del ratón. Utiliza técnicas de inmunotinción e imágenes confocales para identificar sinapsis funcionales en diferentes regiones de frecuencia en cada turno coclear.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con el manejo de animales se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Selección de animales

1. Para todos los experimentos, utilice ratones machos C57BL/6J adultos (8 semanas de edad) como modelo animal.
   NOTA: Los ratones C57BL/6J portadores de una variante de empalme del Cdh23 presentan una senescencia acelerada en el sistema auditivo, que se refleja en una pérdida del 40% de las sinapsis en cinta en el giro basal de la cóclea y una pérdida del 10% en el giro medio a los 6 meses de edad, seguido de....

Resultados

Figura 1: Localización de la frecuencia coclear en ratones. (A) Una imagen representativa de la cóclea explantada completa, que se ha diseccionado del hueso temporal bajo un microscopio de disección estereoscópica. (B) La cóclea del ratón se divide en giros apical, medio y basal, donde se extirpa la pared lateral de la cóclea. Los círculos rojos en l.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Clorhidrato de ketamina	Gutian Pharmaceutical Co., Ltd., Fujian, China	H35020148	100 mg/kg
Clorhidrato de xilacina	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EE. UU.	X-1251	10 mg/kg
Aparato de fisiología TDT	Tucker-Davis Technologies, Alachua, FL, EE. UU.	Sistema de Fisiología Auditiva III
Software SigGen/BioSig	Tucker-Davis Technologies, Alachua, FL, EE. UU.	Sistema de Fisiología Auditiva III
Almohadilla eléctrica	Diversión para mascotas	11072931136
Pinzas Dumont 3#	Fine Science Tools, North Vancouver, B.C., Canadá	0203-3-PO
Pinzas Dumont 5#	Fine Science Tools, North Vancouver, B.C., Canadá	0209-5-PO
Microscopio estereoscópico de disección	Nikon Corp., Tokio, Japón	SMZ1270
Suero de cabra	ZSGB-BIO, Pekín, China	ZLI-9021
Receptor antiglutamato 2, extracelular, clon 6C4	Millipore Corp., Billerica, MA, EE. UU.	MAB397	ratón
Ratón purificado anti-CtBP2	BD Biosciences, Billerica, MA, EE. UU.	612044	ratón
Alexa Fluor 568 cabra anti-ratón IgG1anticuerpo	Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EE. UU.	A21124	cabra
Alexa Fluor 488 anticuerpo IgG2a anti-ratón de cabra	Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EE. UU.	A21131	cabra
Medio de montaje que contiene DAPI	ZSGB-BIO, Pekín, China	ZLI-9557
Microscopía fluorescente confocal	Leica Microsystems, Wetzlar, Alemania	TCS SP8 II
Software Image Pro Plus	Cibernética de los Medios de Comunicación, Bethesda, MD, EE. UU.	Versión 6.0
Otoscopio de bolsillo de diagnóstico profesional	Lude Aparato Médico e Instrumentos Comercio Co., Ltd., Shanghai, China	HS-OT10
Electrodo de aguja	Amistad Electrónica Médica Co., Ltd., Xi'an, China	Artículo 1029	20 mm, 28 g
Altavoz de campo cerrado	Tucker-Davis Technologies, Alachua, FL, EE. UU.	CF1